Морфология и культивирование микроорганизмов. Чурикова В.В - 41 стр.

                                    41
    Схема разведения в 10000 раз:

1 г почвы + 99 мл воды → 100 мл (разведение 1:100)
                          1 мл + 9 мл воды 10 мл (разведение 1:1000)
                                           1 мл + 9 мл воды 10 мл
                                                            (1:10000)
                                                                1 мл
                                                        (в чашку Петри).
     В некоторых случаях заменяют два последних разведения (по 9 мл) на
одно в 99 мл Н2О (в колбе).
     Получив нужное разведение (в 10000-100000 раз и более), берут из
этого последнего разведения 1 мл почвенной болтушки и вносят в
стерильную чашку Петри. Затем в ту же чашку Петри выливают
стерильный расплавленный РПА, имеющий температуру не выше 45оС,
предварительно проведя горлышко пробирки через пламя спиртовки.
Осторожным круговым вращением чашки агар сразу же после его
внесения перемешивают с суспензией.
     Этот способ посева в чашки Петри под питательную среду называется
глубинным. Чашки с застывшим агаром переворачивают вверх дном,
чтобы избежать попадания на поверхность агара конденсационной воды с
крышки, и помещают в термостат при 25оС, через несколько дней
подсчитывают количество выросших колоний и определяют, сколько
микробов содержалось в 1 г исследуемой почвы. Для этого число
выросших колоний умножают на степень разведения, например, на 10000.
     Правила пересева:
1. Для каждой операции применяют новую пипетку (стерильную).
2. Бумажные пакеты, в которые завернуты пипетки, вскрывают у верхнего
   конца, не дотрагиваясь руками или какими-либо предметами до нижней
   части пипетки.
3. Пробирки с водой открывают на минимальное время, необходимое для
   того, чтобы набрать или внести нужное количество жидкости, причем
   пробирку в этот момент держат не вертикально, а наклонно.
4. Ватные пробки на стол не кладут, а держат их за верхнюю часть
   пальцами правой руки: перед закрыванием пробирки пробку проводят
   через пламя спиртовки (если вата загорится, погасить ее, закрывая
   ладонью).
5. Содержимое пробирки, закрытой ватной пробкой, перемешивают, не
   смачивая пробку; это достигается путем простукивания пробиркой по
   ладони руки.
     Очень важным моментом работы по определению численности
микроорганизмов в субстрате является учет выросших колоний. Колонии
бактерий подсчитывают обычно через 3, колонии грибов и дрожжей –
через 5-7, а колонии актиномицетов – через 5-15 суток инкубации. Работу
проводят, не открывая чашек Петри. Для этого чашки Петри
просматривают в проходящем свете и просчитанные колонии отмечают
чернилами или тушью на наружной стороне дна чашки Петри.