Морфология и культивирование микроорганизмов. Чурикова В.В - 48 стр.

                                  48
питательной среде; 2) выделение чистой культуры заведомо из одной
клетки; 3) методом посева на плотную питательную среду.
     Самым ранним методом выделения чистой культуры микроорганизма
является метод разведений, предложенный Пастером. Суть метода
заключается в том, что берут ряд пробирок с жидкой питательной средой и
делают постепенное разбавление культуры до такого состояния, когда в
пробирке оказывается одна клетка. Последняя пробирка, в которой
наблюдается рост микроорганизмов, условно считается чистой.
     Выделение чистой культуры из одной клетки под контролем
микроскопа можно проводить разными способами; капельным (по методу
Линднера) с помощью микроманипулятора и микроселектора. Выделение
чистой культуры по методу Линднера проводится следующим образом: на
стерильное покровное стекло стерильным чертежным пером наносят капли
разбавленной суспензии микроорганизма, помещают покровное стекло над
лункой предметного стекла и просматривают в микроскоп. Под
микроскопом отмечают капли, в которых находится одна клетка.
Препараты помещают в термостат. После проращивания отмеченные
капли снимают стерильной фильтровальной бумагой в пробирку со
стерильной средой. Этот метод используют при работе с крупными
микроорганизмами.
     Микроманипулятор – прибор, позволяющий с помощью специальной
микроскопической пипетки производить захват одной клетки под
контролем микроскопа. Извлеченную клетку переносят в пробирку со
стерильной жидкой средой. Используется также микроселектор
Перфильева. На столике микроскопа смонтирован прибор, основной
частью которого является прямоугольный капилляр. В капилляр набирают
разбавленную суспензию клеток и просматривают в микроскоп. Место, где
расположена одна клетка, удаленная от других, выламывается и
помещается в пробирку со стерильной питательной средой.
     В чистую культуру микроорганизмы могут быть выделены из
различных естественных субстратов путем посева на плотную
питательную среду. Микроколонию, выросшую на поверхности
питательной среды, микроскопируют, проверяя ее однородность, и
описывают, а затем проводят пересев на скошенный агар, в столбик агара
и т.д. Этот метод наиболее прост, и им часто пользуются для выделения
чистой культуры микроорганизмов.
     Порядок работы. 1. Приготавливают две пробирки с РПА, одна из
которых со скошенной поверхностью, а вторая – с прямой. Для этого
пробирку, ранее наполненную на 1/3 объема стерильной питательной
агаровой средой, нагревают на водяной бане до полного ее расплавления.
Затем остужают в наклонном положении, чтобы питательная среда имела
наибольшую площадь, но не доходила до ватных пробок.
     2. Просматривают чашки Петри с посевами микробов из почвы, воды
и воздуха, выбирают хорошо отграниченную колонию и отмечают ее
карандашом по стеклу. Делают описание колонии, отметив форму, цвет,