Методические указания к самостоятельной работе и лабораторному практикуму по физической химии "Хроматографические методы анализа". Цыренова С.Б - 28 стр.

       Выполнение работы. 3г силикагеля растирается в ступке с 0,5мл водного раствора
бромкрезол-зеленого до получения однородной желтой окраски. Затем добавляется 1 капля
20%-ного раствора аммиака и вновь осторожно растирается, при этом окраска геля меняется
с желтой на темно-голубую. Если при добавлении индикатора силикагель сразу окрашивает-
ся в голубой цвет, то добавление аммиака излишне.
       Полученная масса заливается 10-15 мл 1%-ного раствора бутилового спирта в хлоро-
форме и переносится через воронку в хроматографическую колонку. Адсорбционный слой
уплотняется или путем постукивания или путем нагнетания в колонку воздуха, при этом по-
верхность силикагеля в колонке обязательно должна быть покрыта жидкостью.
       Смесь кислот-муравьинной, уксусной, пропионовой и масляной в количестве 8-10мл –
нейтрализуется 0,1н раствором щелочи по фенолфталеину и выпаривается на водяной бане
досуха. Выпаренный остаток обрабатывается 2 каплями серной кислоты (1:1) до растворения
солей, добавляется 0,1г безводного сернокислого натрия и из полученной смеси органиче-
ские кислоты извлекаются 1%-ным раствором бутилового спирта в хлороформе 5-кратно так,
чтобы общее количество полученного раствора составляло 5мл.
       Раствор органических кислот в хлороформе заливается в хроматографическую колон-
ку. Под давлением, создаваемым при помощи резиновой груши, раствор передвигается вниз
по колонке, в результате чего происходит разделение кислот, и определенные часы колонки
приобретают соответствующую окраску. Так, например, уксусная кислота проявляется в ви-
де канареечно – или оранжево-желтой полосы, масляная кислота – в виде светло-зеленой по-
лосы, муравьиная кислота – в виде белой с желтоватым оттенком. Когда уровень раствора
над колонкой силикагеля почти достигает начала колонки, прибавляется чистая порция 1%-
ного бутилового спирта в хлороформе, и эта операция повторяется до тех пор, пока слой со-
держащий масляную кислоту, не достигает нижнего конца колонки. При продолжении про-
мывания этим же раствором из колонки вымывается масляная кислота и собирается в от-
дельный приемник, затем производится промывание колонки 5%-ным раствором бутилового
спирта в хлороформе. При этом вымывается сначала пропионовая кислота, затем уксусная
кислота, которые также собираются в отдельные приемники. Таким образом, кислоты вымы-
ваются из колонки в определенном порядке, а именно: масляная, пропионовая, затем уксус-
ная. В самой верхней части колонки остается муравьиная кислота.
       Элюированные кислоты, собранные в отдельные колбы титруются 0,05н раствором
NaOH в присутствии фенол-фталеина. Белое кольцо муравьиной кислоты, находящееся в са-
мой верхней части колонки, не элюируется. Поэтому слой силикагеля, содержащий муравьи-
ную кислоту, механически отделяется от колонки, помещается в колбе, куда добавляется 30
мл воды. Содержимое тщательно перемешивается и титруется NaOH в присутствии фенол-
фталеина.
       Рассчитывается содержание каждой кислоты процент выхода от взятого количества.

      Определение фракций молочных белков методом гель-хроматографии (по К.
Буткусу и В. Буткене)

       Метод основан на разделении белков, элюируемых через гель декстрана (сефадекс).
       Сухой дефадекс суспензируют в дистиллированной воде или в соответствующем бу-
фере в течение 48-72 ч. Мельчайшие частицы геля декантируют. Колонку укрепляют в стро-
го вертикальном положении. В основание колонки вставляют перфорированный диск из
плексигласа пористостью № 1, на него насыпают песок слоем 0,5 см и на песок кладут диск
из фильтрованной бумаги. Над колонкой укрепляют стеклянную воронку, помещая в нее
стеклянную палочку таким образом, чтобы ее кончик частично закрывал выход из воронки, и
заполняют ее разведенным раствором сефадекса. Стеклянная палочка должна настолько
прикрывать выход из воронки, чтобы суспензия сефадекса могла просачиваться в колонку
тонкой струйкой. После того как слой сефрадекса осядет в колонке на высоту 2-5 см, откры-
вают кран колонки для медленного истечения жидкости, колонку продолжают наполнять се-