Методические указания к самостоятельной работе и лабораторному практикуму по физической химии "Хроматографические методы анализа". Цыренова С.Б - 30 стр.

       Для установления абсолютного количества вещества в пробе удобно пользоваться ме-
тодом внутреннего стандарта. Метод не требует точной дозировки и основан на сравнении
площадей пиков вещества - метки (в нашем случае - энантовая кислота) и определяемого
компонента. В приготовленный стандартный раствор добавляют точно отмеренное количе-
ство раствора энантовой кислоты.
       По хроматограммам стандартного раствора с энантовой кислотой определяют градуи-
ровочную константу К для каждой кислоты по формуле
                                                S эVх
                                          К=
                                                S хVэ
       где Sэ - площадь пика энанта, мм2; Sх - площадь пика кислоты, мм"; Vэ - концентра-
ция энанта, мг%; Vх - концентрация кислоты,мг%.
       В анализируемую смесь необходимо добавить такое же количество стандартного рас-
твора. Зная градуированные константы для каждой кислоты, можно подсчитать массу любой
кислоты.
       Приготовление реактивов. Реактив 1 (стандартный раствор энантовой кислоты).
Взвешивают около 100 см3 энантовой кислоты, растворяют в ацетоне и разбавляют в мерной
колбе до 100 см3 дистиллированной водой.
       Реактив 2 (стандартный раствор жидких кислот). Состав и концентрация этого рас-
твора должны быть близкими составу СЛЖК исследуемого продукта. Взвешивают нужное
количество кислот, добавляют небольшое количество ацетона для полного растворения ки-
слот и доливают дистиллированной водой до 100 см3.

      Определение содержания витамина А методом жидкостно-адсорбционной хрома-
тографии

        Метод основан на щелочном гидролизе жиров, гидролизе витамина А до свободной
формы, экстакции диэтиловым эфиром неомыляемого остатка, выпаривании эфира, раство-
рении остатка в растворителе, используемом в качестве основного компонента подвижной
фазы (элюента) и определении витамина А методом ВЭЖХ.
        Так как жирорастворимые витамины легко разрушаются под действием света, кисло-
рода воздуха и других факторов, во время анализа необходимо соблюдать специальные меры
предосторожности, защищающие витамины от воздействия этих факторов: определение про-
водят, предохраняя от света, в присутствии антиоксиданта, все операции от взятия навески
продукта до получения результата выполняют в течение рабочего дня.
        Выполнение работы. Навеску молока или молочных продуктов (20 г), взятую с точно-
стью до 0,01 г, помещают в круглодонную колбу, соединенную шлифом с обратным холо-
дильником, добавляют 40-60 см3 этилового спирта и 0,2 г аскорбиновой кислоты. Затем в
колбу вносят 5-7 см3 50%-ного раствора гидроксида калия. Для продуктов (масло сливочное
и др.) с высоким содержанием жира (более 40%) на навеску образца 3-5 г берут 4-8 см3 ще-
лочи.
        После добавления щелочи смесь кипятят 30 мин. на водяной бане с обратным водя-
ным холодильником, охлаждают, переливают в делительную воронку и добавляют воду до
окончательной концентрации спирта около 30-35%. Признак полного омыления - прозрачная
смесь после добавления воды. При образовании мути необходимо повторить омыление с но-
вой навеской, увеличив объем щелочи для омыления. Затем смесь экстрагируют эфиром 4
раза: сначала объемом, равным объему добавленной воды, а затем объемами на 20% мень-
шими. Колбу после омыления ополаскивают эфиром.
        Объединенный эфирный экстракт отмывают от щелочи водой, контролируя рH по фе-
нолфталеину. К экстракту добавляют 8-10 г безводного сульфата натрия, выдерживают 20-30
мин. в темном месте и медленно фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круг-
лодонную колбу, промывая сульфат натрия и фильтр эфиром. Затем эфир полностью отго-