Методические указания к самостоятельной работе и лабораторному практикуму по физической химии "Хроматографические методы анализа". Цыренова С.Б - 29 стр.

фадексом. Критерием правильного наполнения является наличие совершенно горизонталь-
ной поверхности сефадекса.
       После того как все частицы осели, на гель помещают диск фильтровальной бумаги.
Колонку промывают буферным раствором. При работе с колонками следует помнить, что
нельзя допускать подсыхания верхнего слоя геля.
       При аккуратной работе колонка с сефрадексом может быть использована многократ-
но. Иногда со временем уменьшается скорость фильтрования жидкости через колонку, что
может быть вызвано значительным измельчением части геля и накоплением загрязнений.
Следует заново наполнить колонку, обмыв (путем декантации) бывший в употреблении пре-
парат сефадекса от мельчайших частиц и загрязнений.
       После пропуска через колонку одного белка ее промывают буферным раствором (2-3
объема колонки), после чего она может быть использована для другого опыта.
       При помощи перестального насоса в колонку вводят 20 м3 исследуемого (обезжирен-
ного) молока. Элюация проводится ацетатным буфером (pH 6,25) по 60см3/ч. Компоненты
белка в элюате постоянно определяются при длине волны 280 м. Результаты регистрируются
самописцем.
       Отдельные компоненты на графике отделяют перпендикулярами и измеряют площади
под пиками. По относительной массе определяют количество отдельных компонентов в про-
центах.

      Определение содержания свободных летучих жирных кислот методом газожид-
костной хроматографии (по С. Урбене и В. Завецкене)

       Метод основан на выделении свободных летучих жирных кислот (СЛЖК) при дис-
тилляции водным паром, разделении их на хроматографе.
       Для анализа берут 75 см3 молока, 50 см3 кислых молочных продуктов, 75 г масла, 25
г созревшего сыра, до 50 г сыра из-под пресса.
       Нужное количество исследуемого продукта переносят в термостойкую колбу, нали-
вают до 150 см3 дистиллированной воды, добавляют 0,5-1 см3 концентрированной Н2SO4 и
1 см3 стандартного раствора энантовой кислоты (реактив 1). Полученный раствор перегоня-
ют с водяным паром. Процесс кипения регулируют так, чтобы уровень жидкости в колбе со-
хранялся постоянным. Следует набрать 250 см3 дистиллята. Время дистилляции - около 55
мин.
       Дистиллят нейтрализуют 0,1 н. раствором гидроксида натрия для образования солей
летучих кислот. Общее количество СЛЖК можно выразить объемом (см3) 0,1 н. гидроксида
натрия, который необходим для нейтрализации кислот, выделенных из 100 г продукта.
       Дистиллят испаряют в водяной бане при температуре 60 град. С. Оставшееся мини-
мальное количество дистиллята из колбы объемом 250 см3 переносят в бутылочку от пени-
циллина и подвергают полному испарению.
       Для хроматографического разделения соли необходимо перевести в кислотное со-
стояние. Для этого к соли добавляют по 2 капли ортофосфорной кислоты и ацетона (раство-
ритель).
       Анализ проводят на газовом хроматографе "Хром-5" с пламенно-ионизационным де-
тектором, на колонке из нержавеющей стали. В качестве твердого носителя используют хро-
матон NAW-HMDS 0,200-0,250 мм. Жидкая фаза - 10% диэтиленгликольадипинат-Lac - 22-
446 с добавлением 2% ортофосфарной кислоты (d=1,87). 1-10 см3 готового раствора свобод-
ных жирных кислот (реактив 2) вводят в хроматограф с помощью микрошприца.
       Условия хроматографирования: температура колонки 100-150 град. С, инжектора 170
град. С; давление азота 0,1 МПа; скорость водорода 30см3/мин, воздуха 500 см3/мин.
       Режим программирования температуры - I: 100-124 град. С (4 град. С/мин); II: 124-150
град. С (6 град. с/мин); III: 150 град. С const 4 мин.; охлаждение - 2 мин.