Общая биотехнология. Данилова Т.Е - 17 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

32
2. В
к
= 0,81
100
)46100(0,150
=
−
•
г.
3.У
с.в.
= 108,0 – 81,0 = 27,0 г.
4. η =
%75
0,108
1000,81
=
•
.
Таким образом, выход культуры от веса исходной среды
составил 75%, тогда безвозвратные потери на
жизнедеятельность микроорганизма определились
величиной (100 - η) = 25%.
3. Приготовление ферментативных вытяжек из
культуры
Материалы и оборудование: Сырая культура плесневого
гриба, встряхиватель, вата, ацетатный буфер рН=4,7;
фосфатный буфер рН=7,3; толуол, углекислый кальций.
Готовится две вытяжки – одна для определения
амилолитических ферментов (АФ), вторая – для
определения протеолитических ферментов (ПФ).
Ход приготовления.
Количество реактивов
Реактивы
АФ ПФ
Сырая культура
плесневого гриба
Вода дистил. (Н
2
О)
Ацетатный буфер рН=4,7
Фосфатный буфер рН=7,3
Толуол
Углекислый кальций
10,0 г
20 мл
20 мл
-
2,0 мл
10,0 г
20 мл
-
20 мл
2,0 мл
500 мг
Встряхивание в течение 30 мин
Фильтрование через вату
33
4. Определение амилолитической активности
Принцип метода .Амилазную активность выражают в
миллилитрах 0,1%-ного раствора крахмала,
гидролизуемого одним миллилитром культуральной
жидкости при 40-45
о
С в течение 15 мин.
Материалы и оборудование:
Штатив, пробирки,
термостат t=40-45
о
С, ацетатный буфер рН=4,7; экстракт
фермента крахмал 0,1%, NaCl насыщенный, йод в
йодистом калии.
Ход работы
Берут 6 пронумерованных пробирок для пробы и 6
пробирок для контроля.
Количество, мл
Реактивы
Проба Контроль
Ацетатный буфер, рН=4,7 1 мл 1 мл
Экстракт фермента 1 мл -
Контроль (вода дист.) - 1 мл
Перемешивание, разведение ½, ¼,1/8, 1/16, 1/32, 1/64
Крахмал, 0,1% 2 мл 2 мл
NaCl, насыщенный 0,4 мл 0,4 мл
Инкубация, 40 – 45
о
С, 15 мин
Охлаждение
Йод в йодистом калии 1 каплю 1 каплю
Для расчета принимают во внимание последнее
разведение, в котором после добавления йода не появился
синий цвет. Например, это третья пробирка, а в четвертой
уже синее окрашивание, тогда разведение культуральной
жидкости соответствует 1/8.
Расчет: 1/8 мл культуральной жидкости расщепляет 2 мл
0,1%-го крахмала:
1 мл ----- Х мл;
Х =
мл16
8
/
1
12
=
•
. 
          150,0 • (100 − 46)                                    4. Определение амилолитической активности
2. Вк =                      = 81,0 г.                       Принцип метода .Амилазную активность выражают в
                 100
                                                          миллилитрах        0,1%-ного        раствора      крахмала,
3.Ус.в. = 108,0 – 81,0 = 27,0 г.                          гидролизуемого одним миллилитром культуральной
                                                          жидкости при 40-45оС в течение 15 мин.
       81,0 • 100                                            Материалы и оборудование: Штатив, пробирки,
4. η =            = 75% .                                 термостат t=40-45оС, ацетатный буфер рН=4,7; экстракт
         108,0
                                                          фермента крахмал 0,1%, NaCl насыщенный, йод в
   Таким образом, выход культуры от веса исходной среды   йодистом калии.
составил 75%, тогда безвозвратные потери на                                       Ход работы
жизнедеятельность         микроорганизма   определились      Берут 6 пронумерованных пробирок для пробы и 6
величиной (100 - η) = 25%.                                пробирок для контроля.
                                                             Реактивы                     Количество, мл
    3. Приготовление ферментативных вытяжек из                                            Проба         Контроль
                       культуры                              Ацетатный буфер, рН=4,7 1 мл               1 мл
   Материалы и оборудование: Сырая культура плесневого
                                                             Экстракт фермента            1 мл          -
гриба, встряхиватель, вата, ацетатный буфер рН=4,7;
                                                             Контроль (вода дист.)        -             1 мл
фосфатный буфер рН=7,3; толуол, углекислый кальций.
                                                               Перемешивание, разведение ½, ¼,1/8, 1/16, 1/32, 1/64
   Готовится две вытяжки – одна для определения
                                                             Крахмал, 0,1%                2 мл          2 мл
амилолитических ферментов (АФ), вторая – для
определения протеолитических ферментов (ПФ).                 NaCl, насыщенный             0,4 мл        0,4 мл
                                                                                               о
                   Ход приготовления.                                     Инкубация, 40 – 45 С, 15 мин
  Реактивы                    Количество реактивов                                 Охлаждение
                                 АФ           ПФ             Йод в йодистом калии         1 каплю       1 каплю
  Сырая культура                10,0 г       10,0 г          Для расчета принимают во внимание последнее
  плесневого гриба                                        разведение, в котором после добавления йода не появился
  Вода дистил. (Н2О)            20 мл        20 мл        синий цвет. Например, это третья пробирка, а в четвертой
  Ацетатный буфер рН=4,7        20 мл          -          уже синее окрашивание, тогда разведение культуральной
                                                          жидкости соответствует 1/8.
  Фосфатный буфер рН=7,3                 -   20 мл           Расчет: 1/8 мл культуральной жидкости расщепляет 2 мл
                                                          0,1%-го крахмала:
  Толуол                       2,0 мл        2,0 мл                             1 мл ----- Х мл;
  Углекислый кальций                         500 мг                                 2 •1
                                                                                Х=       = 16 мл .
             Встряхивание в течение 30 мин                                          1/ 8
                Фильтрование через вату
                                   32                                                 33

Страницы