Общая биотехнология. Данилова Т.Е - 18 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

34
Следовательно, 1 мл неразведенной культуральной
жидкости расщепляет за 15 мин 16 мл 0,1%-го раствора
крахмала.[31]
5. Определение протеолитической активности
Принцип метода: В результате расщепления белков под
действием протеолитических ферментов, образуются
аминокислоты. Учет аминокислот осуществляется путем
их связывания в окрашенные комплексы.
Материалы и оборудование:
Штатив, пробирки,
термостат t=37
о
С, фосфатный буфер рН=7,3; экстракт
фермента, желатин 0,1%, медный раствор.
Ход работы
Берут 6 пронумерованных пробирок пробы и 6
пробирок контроля.
Количество, мл
Реактивы
Проба Контроль
Фосфатный буфер, рН=7,3 1 мл 1 мл
Экстракт фермента 1 мл -
Контроль (вода дист.) - 1 мл
Перемешивание, разведение ½, ¼,1/8, 1/16, 1/32, 1/64
Желатин, 0,1% 2 мл 2 мл
Инкубация, 37
о
С, 20 мин
Медный раствор 2 мл 2 мл
Сравнивают контрольные пробирки с пробирками,
содержащими экстракт фермента. Для расчета принимают
во внимание разведение, в котором после добавления
медного раствора появился отличительный цвет. Единицы
протеолитической активности рассчитывают аналогично
амилолитической активности.
35
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 2
ГЛУБИННЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ
Глубинное культивирование позволяет устранить
некоторые из недостатков характерные поверхностной
ферментации. В частности, глубинная ферментация
предоставляет большие возможности для управления и
автоматизации, высокую асептику и более широкие
возможности для масштабирования.
Дрожжеподобные микроорганизмы и спороносные
бактерии, реже – актиномицеты обладают способностью
накапливать в среде амилолитические ферменты (ά- и β-
амилазы, глюкоамилазы комплекс ферментов, называемый
в литературе декстриназой ). Наиболее часто используют
для этого плесневый гриб Endomycopsis fibuliger. Выход
амилолитических ферментов у микроорганизмов зависит
от состава среды, способа культивирования и возраста
культуры.
Ферменты, обладающие амилолитической активностью,
можно получить и использовать в виде культуры
микроорганизмов и очищенных препаратов. Для выделения
амилолитических ферментов в работе использована
глубинная культура продуцента.[32,33]
Цель работы - получение амилолитических ферментов
глубинным культивированием Endomycopsis fibuliger.
Работа рассчитана на два лабораторных занятия или 12
академических часов. Формируется общий отчет по
результатам 2-х лабораторных занятий.
Первое занятие
План работы
1. Приготовление сред и стерилизация.
2. Приготовление посевного материала. 
   Следовательно, 1 мл неразведенной культуральной                 ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 2
жидкости расщепляет за 15 мин 16 мл 0,1%-го раствора       ГЛУБИННЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ
крахмала.[31]
                                                              Глубинное культивирование позволяет устранить
     5. Определение протеолитической активности            некоторые из недостатков характерные поверхностной
   Принцип метода: В результате расщепления белков под     ферментации. В частности, глубинная ферментация
действием протеолитических ферментов, образуются           предоставляет большие возможности для управления и
аминокислоты. Учет аминокислот осуществляется путем        автоматизации, высокую асептику и более широкие
их связывания в окрашенные комплексы.                      возможности для масштабирования.
   Материалы и оборудование: Штатив, пробирки,                Дрожжеподобные микроорганизмы и спороносные
термостат t=37оС, фосфатный буфер рН=7,3; экстракт         бактерии, реже – актиномицеты обладают способностью
фермента, желатин 0,1%, медный раствор.                    накапливать в среде амилолитические ферменты (ά- и β-
                       Ход работы                          амилазы, глюкоамилазы комплекс ферментов, называемый
   Берут 6 пронумерованных пробирок пробы и 6              в литературе декстриназой ). Наиболее часто используют
пробирок контроля.                                         для этого плесневый гриб Endomycopsis fibuliger. Выход
 Реактивы                   Количество, мл                 амилолитических ферментов у микроорганизмов зависит
                               Проба         Контроль      от состава среды, способа культивирования и возраста
 Фосфатный буфер, рН=7,3        1 мл            1 мл       культуры.
 Экстракт фермента              1 мл              -           Ферменты, обладающие амилолитической активностью,
 Контроль (вода дист.)      -                   1 мл       можно получить и использовать в виде культуры
    Перемешивание, разведение ½, ¼,1/8, 1/16, 1/32, 1/64   микроорганизмов и очищенных препаратов. Для выделения
 Желатин, 0,1%                  2 мл            2 мл       амилолитических ферментов в работе использована
                 Инкубация, 37оС, 20 мин                   глубинная культура продуцента.[32,33]
                                                              Цель работы - получение амилолитических ферментов
 Медный раствор               2 мл          2 мл           глубинным культивированием Endomycopsis fibuliger.
   Сравнивают контрольные пробирки с пробирками,              Работа рассчитана на два лабораторных занятия или 12
содержащими экстракт фермента. Для расчета принимают       академических часов. Формируется общий отчет по
во внимание разведение, в котором после добавления         результатам 2-х лабораторных занятий.
медного раствора появился отличительный цвет. Единицы
протеолитической активности рассчитывают аналогично                           Первое занятие
амилолитической активности.
                                                                        План работы
                                                              1. Приготовление сред и стерилизация.
                                                              2. Приготовление посевного материала.

                           34                                                        35

Страницы