Общая биотехнология. Данилова Т.Е - 19 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

36
3. Посев на ферментационную среду.
4. Отбор проб.
5. Подготовка бумажных фильтров.
1.Приготовление сред и стерилизация
Работу проводят с дрожжеподобным микроорганизмом
Endomycopsis fibuliger.
Среда (А) для выращивания посевного материала
содержит : 2% кукурузного экстракта (задается по
рефрактометру) – 20мл; водопроводной воды- 80 мл; рН –
естественный. Среду наливают в колбу на 750 мл и
стерилизуют при 152 кПа.
Среда (Б) имеет следующий состав (г/л): кукурузный
крахмал – 10; кукурузный экстракт – 30. Олеиновую
кислоту вносят в каждую колбу в количестве 0,2%; рН –
4,0 (доводят рН концентрированной HCl). Среду готовят на
водопроводной воде в количестве 100 мл в колбе на 750 мл
и стерилизуют при 152 кПа.
Характеристика компонентов питательных сред
используемых в работе приведена в приложении 3.
2. Приготовление посевного материала
В жидкую среду (А) переносят с косяка поверхностную
культуру с остатками твердой питательной среды размером
10х10 мм. Посевным материалом служит 24-часовая
культура гриба, выращенная при t=30
о
на круговой
качалке.
3.Посев на ферментационную среду
Количество вносимого в среду (Б) посевного материала
составляет 1%. Посев осуществляется в
микробиологическом боксе.
Условия культивирования.
Продуцент культивируют на
качалке 200-220 об/мин в течение 72 ч при t=28-30
о
.
37
Мицелий гриба при культивировании на качалке образует
кашеобразную массу. Культуральная жидкость должна
оставаться прозрачной, ее помутнение свидетельствует о
бактериальной инфекции.
4.Отбор проб
Отбор проб проводится через 24, 48 и 72 часа
культивирования
.
Стерильными пипетками в асептических условиях
отбирают по 25 мл пробы в стерильные пробирки и ставят
в холодильник. Через 72 часа культивирования колбы
снимают с качалки и убирают также в холодильник.
Отобранные пробы КЖ используют для определения
морфологического состояния культуры, контроля рН среды
и динамики накопления биомассы, ферментов в процессе
глубинного культивирования
5. Подготовка бумажных фильтров
Бумажные фильтры высушивают до постоянной массы
при t=105
о
, взвешивают до четвертого знака, регистрируют
номер, вес каждого фильтра и оставляют в эксикаторе.
Второе занятие
План работы
1.Оценка морфологического состояния культуры в
процессе культивирования
2.Определение биомассы.
3.Определение рН среды.
4.Определение ферментативной активности КЖ.
1. Оценка морфологического состояния культуры
Готовят препараты грибной культуры (раздавленная
капля). Микроскопируют препараты и делают зарисовки 
   3. Посев на ферментационную среду.                       Мицелий гриба при культивировании на качалке образует
   4. Отбор проб.                                           кашеобразную массу. Культуральная жидкость должна
   5. Подготовка бумажных фильтров.                         оставаться прозрачной, ее помутнение свидетельствует о
                                                            бактериальной инфекции.
          1.Приготовление сред и стерилизация
   Работу проводят с дрожжеподобным микроорганизмом                              4.Отбор проб
Endomycopsis fibuliger.                                            Отбор проб проводится через 24, 48 и 72 часа
   Среда (А) для выращивания посевного материала            культивирования.
содержит : 2% кукурузного экстракта (задается по               Стерильными пипетками в асептических условиях
рефрактометру) – 20мл; водопроводной воды- 80 мл; рН –      отбирают по 25 мл пробы в стерильные пробирки и ставят
естественный. Среду наливают в колбу на 750 мл и            в холодильник. Через 72 часа культивирования колбы
стерилизуют при 152 кПа.                                    снимают с качалки и убирают также в холодильник.
      Среда (Б) имеет следующий состав (г/л): кукурузный       Отобранные пробы КЖ используют для определения
крахмал – 10; кукурузный экстракт – 30. Олеиновую           морфологического состояния культуры, контроля рН среды
кислоту вносят в каждую колбу в количестве 0,2%; рН –       и динамики накопления биомассы, ферментов в процессе
4,0 (доводят рН концентрированной HCl). Среду готовят на    глубинного культивирования
водопроводной воде в количестве 100 мл в колбе на 750 мл
и стерилизуют при 152 кПа.                                         5. Подготовка бумажных фильтров
   Характеристика     компонентов   питательных      сред     Бумажные фильтры высушивают до постоянной массы
используемых в работе приведена в приложении 3.             при t=105о, взвешивают до четвертого знака, регистрируют
                                                            номер, вес каждого фильтра и оставляют в эксикаторе.
         2. Приготовление посевного материала
   В жидкую среду (А) переносят с косяка поверхностную                          Второе занятие
культуру с остатками твердой питательной среды размером
10х10 мм. Посевным материалом служит 24-часовая                      План работы
культура гриба, выращенная при t=30о на круговой            1.Оценка морфологического состояния культуры в
качалке.                                                    процессе культивирования
                                                            2.Определение биомассы.
           3.Посев на ферментационную среду                 3.Определение рН среды.
   Количество вносимого в среду (Б) посевного материала     4.Определение ферментативной активности КЖ.
составляет      1%.     Посев     осуществляется      в
микробиологическом боксе.                                       1. Оценка морфологического состояния культуры
   Условия культивирования. Продуцент культивируют на          Готовят препараты грибной культуры (раздавленная
качалке 200-220 об/мин в течение 72 ч при t=28-30о.         капля). Микроскопируют препараты и делают зарисовки

                           36                                                          37

Страницы