Общая биотехнология. Данилова Т.Е - 8 стр.

растворенных белков с последующей их агрегацией и         сорбентом, в результате которой формируются зоны
осаждением. Для ферментов в качестве высаливающих         белковых фракций.[23,24, 5 ].
агентов используют соли щелочных металлов или сульфат        После стадии концентрирования вышеуказанными
аммония. Метод высаливания солями удобен для              хроматографическими методами получается сырец,
препаративного выделения отдельных фракций белка. При     содержащий      50-80%     целевого    фермента.    На
этом выделение белка наблюдается при весьма высоких       заключительных стадиях выделения и очистки ферментов
концентрациях солей и как следствие возникает             также    применяют       хроматографические    методы:
необходимость в операциях по переработке стоков и         молекулярно-ситовая,    аффинная,   высокоэффективная
регенерации солей.                                        жидкостная хроматография, иммуноадсорбция. При этих
   Растворимость ферментов также часто снижают с          процессах используются иммобилизованные на матрице
помощью органических растворителей. Данный процесс,       специфические лиганды , к которым имеют сродство те
называемый кристаллизацией, наиболее полно реализуется    или иные ферменты [25].
при охлаждении раствора до -10о С. Для его проведения        На завершающих этапах технологических схем
используют различные кристаллизаторы - емкостные,         выделения и очистки ферментов практикуется и
шнековые, барабанные и другие, конструкции которых        гельфильтрация. Поры внутри гранул геля имеют размеры
описаны в [8,9,22]. Такие аппараты имеют охлаждающие      недоступные для крупных молекул, тогда как более
рубашки или снабжены различными теплообменными            мелкие молекулы легко в них проникают [5,26].
элементами. При этом требуются внушительные объемы
органического растворителя и операции по его
регенерации.                                                       ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 1
   На более поздних стадиях разделения смеси ферментов       ПОВЕРХНОСТНЫЙ СПОСОБ КУЛЬТИВИРО-
для концентрирования раствора применяют различные           ВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРОДУЦЕНТОВ
модификации      хроматографических     методов.    При      ФЕРМЕНТОВ НА ТВЕРДЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ
адсорбционной хроматографии используется различие в                       СРЕДАХ
относительном сродстве белков к твердому адсорбенту или
неподвижной фазе, распределительной – относительная          На     первых     этапах    развития     ферментная
растворимость белков между подвижной и неподвижной        промышленность как специализированное производство по
фазой, в качестве последней, наоборот, используется       выращиванию микробных продуцентов шла по пути
жидкость удерживаемая на инертном носителе. В             культивирования     микроорганизмов     поверхностным
ионообменниках белки связываются с неподвижной фазой      способом на твердых питательных средах. Поэтому в
с помощью электростатических сил. Фронтальная             Китае, Японии, Англии, Франции и т.д. в первую очередь
ионообменная     хроматография     представляет   собой   создавались предприятия на основе поверхностного
фильтрацию раствора ферментов через колонку с             способа культивирования плесневых грибов и бактерий. В
                                                          настоящее время в мировой ферментной промышленности

                          14                                                        15