Введение в прикладную биотехнологию. Ефимова М.В. - 79 стр.

ния активности фермента холинэстеразы токсином водорослей. В зави-
симости от степени угнетения фермент с различной силой действует на
субстрат – ацетилхолин, в результате гидролиза которого в инкубаци-
онную среду поступает различное количество уксусной кислоты. На
конечном этапе проводят косвенное определение количества гидроли-
зованного субстрата по выделившейся уксусной кислоте. Это определе-
ние проводится при помощи фотоэлектроколориметра по изменению
цвета индикатора бромтимолового синего в среде или при помощи
рН-метра по изменению рН инкубационной смеси. Для этой цели и при-
меняют анализатор ферментативной активности АФ-1, принцип действия
которого основан на измерении электропроводности инкубационной сме-
си, изменяющейся в процессе разложения субстрата ферментом.
     Токсины некоторых сине-зеленых водорослей применяют в меди-
цинской практике в качестве анестетиков благодаря их свойству блоки-
ровать болевые ощущения.


        8.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ТОКСИНОВ И СПОСОБЫ
                      ИХ ВЫДЕЛЕНИЯ

                  8.1.1. Токсин Microcystis aeruginosa

     Токсичность Microcystis aeruginosa изучалась канадскими исследо-
вателями Бишопом и Корхамом. По Бишопу, токсин микроцистин явля-
ется нелетучей кислотой, имеющей карбоксильные группы; имеет пеп-
тидную природу. Токсин содержит 10 аминокислотных остатков таких
кислот, как аспарагиновая, глутаминовая, D-серин, валин, орнитин, ала-
нин, лейцин. В процессе дальнейших исследований Марти и Капиндаль
показали, что в токсичный комплекс входят еще семь аминокислот,
а именно: тирозин, треонин, пролин, глицин, аргинин, изолейцин, фени-
лаланин. Микроцистин хорошо растворим в воде, этиловом, бутиловом,
метиловом спирте.
     Марти и Капиндалем разработан метод получения микроцистина.
Для его получения лиофильно высушенные клетки экстрагируют при
температуре 0ºС раствором карбоната натрия и дважды – раствором
бикарбоната натрия. Прозрачные, окрашенные супернатанты, получен-
ные после центрифугирования, объединяют и вновь подвергают лиофи-
лизации. Полученный материал многократно экстрагируют холодным
н-бутанолом. Экстракты бутанола делят на 10 равных частей и каждую
фракцию сгущают под вакуумом до удаления растворителя. Смолистый
остаток разбавляют небольшими порциями воды и вновь центрифуги-
руют для удаления нетоксичного коричневого не растворимого в воде
остатка. Супернатант подвергают диализу через коллоидные пленки.
                                  79