Основы клинической иммунологии и методологические подходы к оценке иммунного статуса. Гончаров А.Г - 65 стр.

преципитируют метку 5% трихлоруксусной кислотой (5 мл/лунку), промывают
фильтр этанолом (5 мл/лунку) и высушивают. Подсчет радиоактивности осуще-
ствляют на У-счетчике, помещая фильтр в сцинтилляционную жидкость сле-
дующего состава: 3 г 2,5-дифенилоксазола (РРО), 0,1 г 1,4-ди-/5-фенил-2-оксазо-
лил/-бензола /РОРОР/, 1 л толуола.
    В отсутствие ИЛ-2 КонА-бласты превращаются в малые лимфоциты и после
24-часового культивирования уровень включения “Н-тимидина составляет 200-
500 имп/мин на 1 лунку. В присутствии ИЛ-2 наблюдается, зависимое от дозы
фактора, увеличение включения метки до 10-25 тыс. имп/мин. Данные по вклю-
чению “Н-тимидина используют для определения активности ИЛ-2 в условных
единицах. За 1 единицу принимается такое количество ИЛ-2, которое индуциру-
ет 50% максимальной пролиферации КонА-бластов, наблюдаемой после добав-
ления стандартного образца (супернатанта мышиных спленоцитов, стимулиро-
ванных КонА, как описано выше). Например: стандартный образец вызывает
максимальную пролиферацию клеток, равную 20000 имп/мин. 50% максималь-
ной пролиферации (т.е. 10000 имп/мин) наблюдается при разведении контроль-
ного, стандартного образца в 16 раз. Тестируемый образец ИЛ-2 вызывает про-
лиферацию, равную 10000 имп/мин, при разведении в 128 раз. Следовательно,
так как 1 единица равна разведению 1/16, то в тестируемом образце содержится
128:16=8 единиц ИЛ-2 в 1 мл.

                             Оценка результатов
    ИЛ-2 является одним из важнейших факторов, обеспечивающих нормальное
развитие иммунного ответа, поэтому нарушение его продукции свидетельствует
о серьезных изменениях в иммунологическом статусе организма. Поскольку
синтез ИЛ-2 осуществляется Т-клетками, имеющими хелперный фенотип
(Lyt-1+, L3T4+ клетками у мышей и OКТ4+ клетками у человека), ингибиция его
продукции указывает в первую очередь на нарушение в этой субпопуляции
лимфоцитов. Однако следует учитывать тот факт, что активация Т-хелперов за-
висит от вспомогательных клеток (макрофагов, дендритических клеток), обеспе-
чивающих процессинг антигена и продукцию интерлейкина-1. Синтез ИЛ-2 в
норме осуществляется только после воздействия на продуцирующие клетки ИЛ-
1 и антигена. Следовательно, нарушение продукции ИЛ-1 также может вызвать
падение продукции ИЛ-2. Напротив, индукция рецепторов к ИЛ-2 на поверхно-
сти Т-клеток является процессом, зависящим, по-видимому, только от антигена
и поэтому в ряде ситуаций является более удобным параметром при оценке ак-
тивности иммунной системы.
    Реально в зависимости от целей исследования тестирование можно прово-
дить двумя способами.
    1. Изучение способности неизвестного фактора стимулировать продукцию
ИЛ-2 или оценка продукции ИЛ-2 в условиях заболевания.
    В первом случае лимфоциты стимулируют исследуемым фактором и прове-
ряют супернатант от стимулированных культур на способность поддерживать
пролиферацию КонА-бластов. В качестве контроля используют стандартный

                                                                            63