ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
66
проводят пересев штамма на среду возрастающих объемов, переходя
постепенно от пробирок к колбам (емкостью 1л), бутылям (емкостью 20 л).
При этом следует соблюдать соотношение посевного и рабочего объема
1:10. Коэффициент заполнения емкостей не должен превышать 0,5 - 0,6.
Культура называется чистой, если родительские и дочерние клетки в
ней практически неразличимы и между ними нельзя установить
родственные связи.
Лиофилизация культур осуществляется путем быстрого
замораживания (от -40 до -60
о
С) суспензии клеток или спор
микроорганизма, приготовленной на среде, богатой белками (кровяная
сыворотка), с последующим высушиванием под вакуумом до остаточной
влажности (0,5 –0,7%). После такой обработки ампулы со спорами и
клетками лиофилизированного микроба запаивают. Метод пригоден как
для споробразующих, так и бесспоровых культур микроорганизмов.
Лиофилизированные формы бактерий могут сохраняться в течение 16-
18 лет,
а споры грибов – в течение 10 лет, не теряя основных свойств.
Производственный этап. Дальнейшую подготовку посевного
материала осуществляют в ферментаторах-инокуляторах, в которых
наращивают посевной материал (рис.22). При этом одноклеточные
культуры доводят до середины Log-фазы (когда клетки делятся
синхронно). Рабочую культуру подают в инокулятор, заполненный
стерильной питательной средой, из расчета 8-10% к объему
питательной
среды. Во избежание утечки посевного материала в инокуляторах и
биореакторах следует поддерживать избыточное давление.
Инокуляторы должны отвечать следующим основным требованиям:
конструктивные простота, удобство и надежность эксплуатации. Посевные
аппараты отечественного производства имеют объем 10, 5, 2 и 0,63 м
3
,
диаметр от 0,9 до 2 м и частоту вращения мешалки от 180 до 270 об/мин.
Общий объем ферментатора заполняют инокулированной средой на 70-
80%, 20-30% объема заполняют газами (инертным – для анаэробов,
воздухом – для аэробов).
Микроорганизм в виде суспензии определенной плотности подают из
инокулятора(-ов) в промышленный биореактор, или ферментатор, в
котором содержится стерильная жидкая питательная среда
. При этом не
должно произойти попадания каких-либо посторонних микробов в
питательную среду вместе с продуцентом. Все соединения системы
должны быть герметично закрытыми.
Для проведения процесса в асептических условиях необходимо
введение дополнительных стадий, обеспечивающих стерилизацию
питательных сред и подаваемого в ферментаторы воздуха. Стерильную
питательную среду засевают с соблюдением правил асептики
через
специальное устройство (рис.23) посевным материалом, выращенным в
лаборатории, поддерживая оптимальный режим в аппарате (температуру,
аэрацию и перемешивание) для развития культуры.
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 62
- 63
- 64
- 65
- 66
- …
- следующая ›
- последняя »
