Методические указания по курсам "Санитарная микробиология", "Санитарно-микробиологический контроль на производстве", КПВ "Микробиология". Инешина Е.Г - 23 стр.

дистиллированной водой, до тех пор пока бумага под фильтром          БГКП (ОКБ) можно определять двумя методами: методом
не перестанет окрашиваться. После последней промывки            мембранных фильтров и титрационным (бродильным) методом.
поверхность фильтра остается розовой (за счет окрашенных             Исследование воды методом мембранных фильтров.
бактерий), а края его становятся бледно-розовыми                Метод основан на фильтрации установленного объема воды
      Затем     мембранный        фильтр    с    окрашенными    через мембранные фильтры, выращивании посевов на
микроорганизмами высушивают и помещают на предметное            дифференциально-диагностической среде и последующей
стекло, предварительно капнув каплю иммерсионного масла на      идентификации колоний по культуральным и биохимическим
стекло и на фильтр, который накрывают тонким покровным          признакам.
стеклом. Микроскопируют с иммерсионным объективом, в                  Перед употреблением мембранные фильтры проверяют на
                                                                отсутствие трещин, отверстий, пузырей и кипятят в
окуляр вкладывают сетчатый микрометр, разделенный на            дистиллированной воде в течение 10 мин (при этом нельзя
мелкие квадраты. Подсчитывают микроорганизмы в 20 полях         допускать скручивания фильтров). Для полного удаления из
зрения (в каждом поле зрения в 4 маленьких квадратах,           фильтров остатков растворителей, которые применяются при их
расположенных по диагонали). Расчет общего количества           изготовлении, кипячение следует повторить 3-5 раз со сменой
бактерий в 1 мл. (X) ведется по формуле:                        дистиллированной воды. Подготовленные таким образом
                           S ⋅ N ⋅ 10   6                       фильтры сохраняются в банках с дистиллированной водой или в
                     X =                    ,   (4)             сухом виде. В день постановки опыта фильтры повторно
                               S1V                              стерилизуют кипячением в дистиллированной воде в течение 10
где S -фильтрующая площадь прибора (мм2);                       мин.
106 - переводной коэффициент квадратных миллиметров в                Фильтрование производят с помощью специальных
квадратные микрометры;                                          приборов или фильтра Зейтца (рис. 9). Перед посевом воды
N - среднее количество бактерий в одном квадрате;               аппарат стерилизуют фламбированием. После остывания на
S1 - площадь квадрата окулярного микрометра (мкм2);             фильтровальный столик, на котором расположена сетка,
                                                                стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр,
V - объем профильтрованной воды (мл).                           прижимают его воронкой или металлическим цилиндром и
                                                                плотно закрепляют специальными винтами. Отросток колбы, в
      Определение бактерий группы кишечных палочек              которую фильтруется вода, с помощью резиновой трубки
     Понятие «бактерии группы кишечных палочек» включает        соединяют с водоструйным или масляным насосом для создания
различных представителей семейства Enterobacteriaсеае: родов    вакуума в приемном сосуде (около 0,25 атм).
Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella и др. По          Объем воды для посева выбирают с учетом таблицы 4, он
нормативной       документации       к    БГКП      относятся   должен быть таким, чтобы на фильтре выросло не более 30
грамотрицательные, не образующие спор палочки, не               изолированных колоний. Рекомендуемый объем питьевой воды -
обладающие оксидазной активностью, ферментирующие лактозу       300мл. Исследуемую воду каждого объема фильтруют не менее
с образованием кислоты и газа при температуре 37°С в течение    чем через 2 фильтра.
5—24 ч (приложение 3, табл. 3.1). По международной                   В воронку или стакан наливают необходимые объемы
классификации такие микроорганизмы относят к общим              воды, начиная с меньших, а затем большие, каждый раз меняя
колиформным бактериям (ОКБ). Они попадают в окружающую          фильтры. Самый меньший объем воды - 1 мл - следует
среду, в том числе и в воду, с испражнениями человека и         фильтровать через фильтр, предварительно смоченный
животных, поэтому обнаружение их свидетельствует о              стерильной водой. После фильтрования верхнюю часть прибора
фекальном загрязнении и эпидемической опасности в               снимают и фильтр осторожно (при сохранении вакуума для
отношении кишечных инфекций.                                    удаления излишка влаги на фильтре) стерильным пинцетом

                                                          45    46