Методические указания по курсам "Санитарная микробиология", "Санитарно-микробиологический контроль на производстве", КПВ "Микробиология". Инешина Е.Г - 39 стр.

UptoLike

Рубрика: 

77
исследуемых предметах (что всегда происходит при
распределении микрофлоры со смытой поверхности в
смачивающей жидкости).
Метод агаровой заливки применяется для определения
микрофлоры различных горизонтальных поверхностей, а также
тканей. Для отбора пробы используется специальная
металлическая пластинка высотой 2 см в виде кольца усеченной
формы с диаметром верхней поверхности круга 5 см и нижней
меньшей - 4см. (рис. 9,а). Перед исследованием кольцо
фламбируют обжиганием, охлаждают, помещают на
поверхность исследуемого объекта нижним краем и заливают
расплавленным и остуженным до 45°С мясопептонным агаром
или средой Эндо. Спустя 5-10 мин после застывания среды
кольцо осторожно снимают и вытряхивают в стерильную чашку
Петри застывшую агаровую пластинку вверх нижней
поверхностью, соприкасавшейся с исследуемым объектом.
Метод удобен тем, что на поверхность среды захватываются все
микроорганизмы, находящиеся на исследуемом участке объекта,
но он не дает представления об общей обсемененности
предметов из-за ограниченности исследуемой площади. Его
рекомендуют применять при небольшой бактериальной
загрязненности.
При оценке санитарного состояния предметов обихода,
изготовленных из тканей (постельное белье, одеяла, одежда и т.
д.) можно применять метод, заключающийся во встряхивании
участка загрязненных тканей над чашкой Петри с питательной
средой. Обследуемую ткань зажимают в специальной
металлической обойме, состоящей из двух колец, вкладываемых
друг в друга (рис.9, б), и помещают над чашкой Петри со средой.
Встряхивание ткани можно производить просто поколачиванием
по ее наружной поверхности стерильным пинцетом или,
закрепив в центре ткани стерильную булавку, несколько раз ее
оттягивают и отпускают. Вместе с пылью из ткани на
питательную среду попадают и находящиеся в ней
микроорганизмы. Чашку закрывают и помещают в термостат
для инкубации.
Определение общей микробной обсемененности объекта
Этот показатель определяют из смачивающей жидкости,
применяемой при взятии смывов. Посев производят по обычной
методике определения общего микробного числа. В пробирках с
78
тампонами или в колбах, содержащих салфетки (после
проведения смывов), общий объем жидкости доводят до 10 мл,
добавляя стерильный изотонический раствор хлорида натрия и
получая исходное разведение 1:10. После интенсивного 2-3-
минутного встряхивания готовят десятикратные разведения. В
зависимости от предполагаемой степени загрязненности посевы
производят из нескольких разведений. Заключение по общей
обсемененности (на 1см
2
поверхности) дают на основании
подсчетов по формуле:
S
10n
M
=
, (6)
где М - общая бактериальная обсемененность(КОЕ/см
2
);
п - количество колоний в 1 мл исходного разведения смыва;
10 - количество миллилитров смачиваемой жидкости;
S - площадь, с которой произведен смыв (см
2
).
Определение титра БГКП в смывах
Определение титра БГКП проводят бродильным методом.
При предполагаемой малой степени фекального загрязнения
предварительно производят посев смыва на среду обогащения
(среда Кесслера). Подсчет титра проводят на 1см
2
поверхности.
При обнаружении БГКП контактным методом или методом
агаровой заливки используют среду Эндо. В этом случае можно
провести расчет числа БГКП на 1 см
2
поверхности исследуемого
предмета (индекс БГКП). Идентификация выделенных культур
БГКП (если это необходимо) ведется как при исследовании
питьевой воды. Однако чаще всего на производстве пользуются
более строгим показателем- по первой бродильной пробе. В этом
случае последовательно отбирают несколько десятков смывов с
разных объектов (с оборудования крупных размеров- 2-4 смыва
из разных мест) на среду Кесслер или Кода. После инкубации
пробирок со смывами в термостате при 37
0
С 18-24ч считают
процент смывов с наличием в них БГКП от общего числа взятых
смывов.
Определение энтерококков в смывах
Проводится титрационным методом или методом
мембранных фильтров. Обильный рост колоний энтерококков
свидетельствует о свежем фекальном загрязнении исследуемого
предмета обихода. За титр энтерококка принимается то
исследуемых предметах (что всегда происходит при                  тампонами или в колбах, содержащих салфетки (после
распределении микрофлоры со смытой поверхности в                  проведения смывов), общий объем жидкости доводят до 10 мл,
смачивающей жидкости).                                            добавляя стерильный изотонический раствор хлорида натрия и
      Метод агаровой заливки применяется для определения          получая исходное разведение 1:10. После интенсивного 2-3-
микрофлоры различных горизонтальных поверхностей, а также         минутного встряхивания готовят десятикратные разведения. В
тканей. Для отбора пробы используется специальная
металлическая пластинка высотой 2 см в виде кольца усеченной      зависимости от предполагаемой степени загрязненности посевы
формы с диаметром верхней поверхности круга 5 см и нижней         производят из нескольких разведений. Заключение по общей
меньшей - 4см. (рис. 9,а). Перед исследованием кольцо             обсемененности (на 1см2 поверхности) дают на основании
фламбируют      обжиганием,      охлаждают,    помещают      на   подсчетов по формуле:
поверхность исследуемого объекта нижним краем и заливают                                     n ⋅ 10
расплавленным и остуженным до 45°С мясопептонным агаром                                 M=          ,   (6)
                                                                                               S
или средой Эндо. Спустя 5-10 мин после застывания среды           где М - общая бактериальная обсемененность(КОЕ/см2);
кольцо осторожно снимают и вытряхивают в стерильную чашку
Петри застывшую агаровую пластинку вверх нижней                   п - количество колоний в 1 мл исходного разведения смыва;
поверхностью, соприкасавшейся с исследуемым объектом.             10 - количество миллилитров смачиваемой жидкости;
Метод удобен тем, что на поверхность среды захватываются все      S - площадь, с которой произведен смыв (см2).
микроорганизмы, находящиеся на исследуемом участке объекта,                    Определение титра БГКП в смывах
но он не дает представления об общей обсемененности                     Определение титра БГКП проводят бродильным методом.
предметов из-за ограниченности исследуемой площади. Его           При предполагаемой малой степени фекального загрязнения
рекомендуют применять при небольшой бактериальной                 предварительно производят посев смыва на среду обогащения
загрязненности.                                                   (среда Кесслера). Подсчет титра проводят на 1см2 поверхности.
      При оценке санитарного состояния предметов обихода,         При обнаружении БГКП контактным методом или методом
изготовленных из тканей (постельное белье, одеяла, одежда и т.    агаровой заливки используют среду Эндо. В этом случае можно
д.) можно применять метод, заключающийся во встряхивании          провести расчет числа БГКП на 1 см2 поверхности исследуемого
участка загрязненных тканей над чашкой Петри с питательной        предмета (индекс БГКП). Идентификация выделенных культур
средой. Обследуемую ткань зажимают в специальной                  БГКП (если это необходимо) ведется как при исследовании
металлической обойме, состоящей из двух колец, вкладываемых       питьевой воды. Однако чаще всего на производстве пользуются
друг в друга (рис.9, б), и помещают над чашкой Петри со средой.   более строгим показателем- по первой бродильной пробе. В этом
Встряхивание ткани можно производить просто поколачиванием        случае последовательно отбирают несколько десятков смывов с
по ее наружной поверхности стерильным пинцетом или,               разных объектов (с оборудования крупных размеров- 2-4 смыва
закрепив в центре ткани стерильную булавку, несколько раз ее      из разных мест) на среду Кесслер или Кода. После инкубации
оттягивают и отпускают. Вместе с пылью из ткани на                пробирок со смывами в термостате при 370С 18-24ч считают
питательную среду попадают и находящиеся в ней                    процент смывов с наличием в них БГКП от общего числа взятых
микроорганизмы. Чашку закрывают и помещают в термостат            смывов.
для инкубации.
   Определение общей микробной обсемененности объекта                         Определение энтерококков в смывах
      Этот показатель определяют из смачивающей жидкости,              Проводится титрационным методом или методом
применяемой при взятии смывов. Посев производят по обычной        мембранных фильтров. Обильный рост колоний энтерококков
методике определения общего микробного числа. В пробирках с       свидетельствует о свежем фекальном загрязнении исследуемого
                                                                  предмета обихода. За титр энтерококка принимается то

                                                            77    78