ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
14
стартовой зоны на пластине должна быть по возможности минимальной,
для ТСХ – 2–3 мм, для ВЭТСХ – 1 мм.
Для нанесения проб используют стеклянные или платиново-
иридиевые капилляры, микропипетки, шприцы, а также специальные до-
зирующие устройства. В ТСХ объемы проб составляют 0,5–3,0 мкл, для
ВЭТСХ ~ 200 нл. Для сохранения активности слоя адсорбента рекоменду-
ется во время нанесения
проб покрывать адсорбент выше линии нанесения
стеклянной пластиной и наносить пробу по возможности быстро.
При проведении идентификации наиболее просто эта процедура вы-
полняется при наличии собственной окраски у разделяемых веществ. Иден-
тификация неокрашенных соединений может проводиться с применением
специфических химических реагентов или инструментальных методов.
Идентификация по регистрации поглощения веществ в
УФ-области
или их собственной флуоресценции основана на введении в слой сорбента
флуоресцирующих индикаторов (люминофоров), которые при облучении
УФ-светом возбуждаются при такой длине волны, при которой детекти-
руемые вещества поглощают. Они становятся хорошо видны в виде тем-
ных зон на зеленоватом светящемся фоне сорбента.
При детектировании с помощью химических реагентов
используют
универсальные реагенты (серная кислота, KMnO
4
, K
2
Cr
2
O
7
, фосфорно-
молибденовая кислота (ФМК)) и специфические – на индивидуальные со-
единения отдельных классов. Так, нингидрин используется для визуализа-
ции аминогрупп, хлорид железа (III) – для фенолов, комплексообразующие
реагенты – для визуализации ионов металлов. Для опрыскивания пластин
применяют пульверизаторы. При этом точность количественных опреде-
лений зависит от качества детектирования. После визуализации разделен-
ных веществ проводят
обработку хроматограмм.
1.3.2. Основные характеристики разделения веществ
в плоскостной хроматографии
Сорбционные свойства системы в ТСХ характеризуются относи-
тельной скоростью перемещения (хроматографическая подвижностью)
R
f
, которая рассчитывается из экспериментальных данных по уравнению:
,
f
l
R
L
=
(7)
где l – расстояние от стартовой линии до центра зоны: L – расстояние, прой-
денное за это же время растворителем.
Наиболее общий подход к качественному анализу основан на значе-
ниях
f
R . Хроматографическая подвижность является чувствительной ха-
рактеристикой вещества, однако она существенно зависит от условий оп-
ределения. Эта трудность преодолевается путем проведения опыта в стро-
го фиксированных стандартных условиях, которые регламентируют размер
пластин, толщину слоя сорбента, объем пробы, длину пути фронта раство-
стартовой зоны на пластине должна быть по возможности минимальной, для ТСХ – 2–3 мм, для ВЭТСХ – 1 мм. Для нанесения проб используют стеклянные или платиново- иридиевые капилляры, микропипетки, шприцы, а также специальные до- зирующие устройства. В ТСХ объемы проб составляют 0,5–3,0 мкл, для ВЭТСХ ~ 200 нл. Для сохранения активности слоя адсорбента рекоменду- ется во время нанесения проб покрывать адсорбент выше линии нанесения стеклянной пластиной и наносить пробу по возможности быстро. При проведении идентификации наиболее просто эта процедура вы- полняется при наличии собственной окраски у разделяемых веществ. Иден- тификация неокрашенных соединений может проводиться с применением специфических химических реагентов или инструментальных методов. Идентификация по регистрации поглощения веществ в УФ-области или их собственной флуоресценции основана на введении в слой сорбента флуоресцирующих индикаторов (люминофоров), которые при облучении УФ-светом возбуждаются при такой длине волны, при которой детекти- руемые вещества поглощают. Они становятся хорошо видны в виде тем- ных зон на зеленоватом светящемся фоне сорбента. При детектировании с помощью химических реагентов используют универсальные реагенты (серная кислота, KMnO4, K2Cr2O7, фосфорно- молибденовая кислота (ФМК)) и специфические – на индивидуальные со- единения отдельных классов. Так, нингидрин используется для визуализа- ции аминогрупп, хлорид железа (III) – для фенолов, комплексообразующие реагенты – для визуализации ионов металлов. Для опрыскивания пластин применяют пульверизаторы. При этом точность количественных опреде- лений зависит от качества детектирования. После визуализации разделен- ных веществ проводят обработку хроматограмм. 1.3.2. Основные характеристики разделения веществ в плоскостной хроматографии Сорбционные свойства системы в ТСХ характеризуются относи- тельной скоростью перемещения (хроматографическая подвижностью) Rf, которая рассчитывается из экспериментальных данных по уравнению: l Rf = , (7) L где l – расстояние от стартовой линии до центра зоны: L – расстояние, прой- денное за это же время растворителем. Наиболее общий подход к качественному анализу основан на значе- ниях R f . Хроматографическая подвижность является чувствительной ха- рактеристикой вещества, однако она существенно зависит от условий оп- ределения. Эта трудность преодолевается путем проведения опыта в стро- го фиксированных стандартных условиях, которые регламентируют размер пластин, толщину слоя сорбента, объем пробы, длину пути фронта раство- 14
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 12
- 13
- 14
- 15
- 16
- …
- следующая ›
- последняя »