Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 17 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

17
лярная масса), пространственная конфигурация, вторичная структура и
электрический заряд, причем эти параметры могут выступать как порознь,
так и в совокупности.
Работа 1. Нативный ступенчатый электрофорез
Диск-электрофорез широко применяется в настоящее время для про-
верки гомогенности ферментных препаратов. Этот метод достаточно бы-
стрый, характеризуется высокой разрешающей способностью и воспроиз-
водимостью, требует небольших количеств исследуемого материала. Ис-
пользуется он и для других целей, например, для идентификации изофер-
ментов, определения молекулярной массы белков и их субъединиц и
т. д.
Диск-электрофорез – метод, сочетающий в себе разделение макромо-
лекул по их общему электрическому заряду, по величине молекулярной
массы и по форме. Использование двухслойного носителя с различным
размером пор и пары буферов, отличающихся между собой по составу и по
значению рН, обеспечивает концентрирование веществ в узкой стартовой зо-
не.
Это является существенным для четкого разделения компонентов смеси.
Процедура:
ПААГ – синтетический продукт, выполняющий функции
молекулярного сита, он химически стабилен и инертен. Прозрачен, лаби-
лен, устойчив к изменениям рН и температуры и не растворим в большин-
стве растворителей. Получают его путем сополимеризации акриламида
(CH
2=CH-CO-NH
2
) и сшивающего агента метиленбисакриламида. Подби-
рая соответствующую концентрацию акриламида, получают гель с нуж-
ным размером пор. При работе с глобулярными белками рекомендуют
пользоваться соотношением между средней величиной молекулярной мас-
сы разделяемых белков (М
r) и концентрацией (с) акриламида, которую
нужно взять для полимеризации:
М
r с, %
< 10 000 > 30
10 000–30 000 15–30
30 000–100 000 7,5–15
>100 000 < 7,5
В качестве катализаторов при получении ПААГ используются пер-
сульфат аммония и тетраметилэтилендиамин (ТЕМЕД). 
лярная масса), пространственная конфигурация, вторичная структура и
электрический заряд, причем эти параметры могут выступать как порознь,
так и в совокупности.

             Работа 1. Нативный ступенчатый электрофорез

     Диск-электрофорез широко применяется в настоящее время для про-
верки гомогенности ферментных препаратов. Этот метод достаточно бы-
стрый, характеризуется высокой разрешающей способностью и воспроиз-
водимостью, требует небольших количеств исследуемого материала. Ис-
пользуется он и для других целей, например, для идентификации изофер-
ментов, определения молекулярной массы белков и их субъединиц и т. д.
     Диск-электрофорез – метод, сочетающий в себе разделение макромо-
лекул по их общему электрическому заряду, по величине молекулярной
массы и по форме. Использование двухслойного носителя с различным
размером пор и пары буферов, отличающихся между собой по составу и по
значению рН, обеспечивает концентрирование веществ в узкой стартовой зо-
не. Это является существенным для четкого разделения компонентов смеси.
     Процедура: ПААГ – синтетический продукт, выполняющий функции
молекулярного сита, он химически стабилен и инертен. Прозрачен, лаби-
лен, устойчив к изменениям рН и температуры и не растворим в большин-
стве растворителей. Получают его путем сополимеризации акриламида
(CH2=CH-CO-NH2) и сшивающего агента метиленбисакриламида. Подби-
рая соответствующую концентрацию акриламида, получают гель с нуж-
ным размером пор. При работе с глобулярными белками рекомендуют
пользоваться соотношением между средней величиной молекулярной мас-
сы разделяемых белков (Мr) и концентрацией (с) акриламида, которую
нужно взять для полимеризации:
                   Мr                           с, %
                 < 10 000                      > 30
               10 000–30 000                 15–30
               30 000–100 000                 7,5–15
                  >100 000                     < 7,5
     В качестве катализаторов при получении ПААГ используются пер-
сульфат аммония и тетраметилэтилендиамин (ТЕМЕД).


                                   17

Страницы