Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 18 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

18
Физический принцип метода. Находящиеся в буферном растворе мак-
ромолекулы обладают некоторым суммарным электрическим зарядом, ве-
личина и знак которого зависят от рН среды. Если через этот раствор, за-
ключенный в канал из изолирующего материала, например стеклянную
трубку, начать пропускать электрический ток, то вдоль канала установится
определенный градиент напряжения, т. е. сформируется электрическое по-
ле. Его напряженность измеряется разностью потенциалов по концам ра-
бочего канала (или его участка), отнесенной к его длине (В/см). Под дейст-
вием поля макромолекулы в соответствии со своим суммарным зарядом
мигрируют в направлении катода или анода, причем их трение об окру-
жающую среду ограничивает скорость миграции. В зависимости от вели
-
чины заряда и размеров молекулы приобретают разные скорости, и в этом –
сущность процесса электрофореза. Постепенно исходный препарат, состо-
явший из различных молекул, разделяется на зоны одинаковых молекул,
мигрирующих с одной и той же скоростью. Со временем эти зоны
распределяются по длине канала.
Для наблюдения за ходом электрофореза в исходный препарат
вносят
краситель, мигрирующий в том же направлении, что и фракционируемые
белки. Он не должен заметным образом связываться с белками, а скорость
его продвижения по гелю должна быть заведомо больше, чем у наиболее
быстро мигрирующего белка. Вместе с тем краситель не должен слишком
сильно отрываться от белков, чтобы его прохождению до
конца пластины
или трубки соответствовало использование большей части
находящегося в них геля для фракционирования белков. В щелочных и
нейтральных буферах, когда кислые белки заряжены отрицательно и миг-
рируют к аноду, а также для любых белков в комплексе с ДДС-Na (см. ни-
же) используют отрицательно заряженные красители. Наибольшее распро-
странение получил
бромфеноловый синий, имеющий достаточно слож-
ную структуру; в его состав, в частности, входят два дибромфенольных ос-
татка. 
     Физический принцип метода. Находящиеся в буферном растворе мак-
ромолекулы обладают некоторым суммарным электрическим зарядом, ве-
личина и знак которого зависят от рН среды. Если через этот раствор, за-
ключенный в канал из изолирующего материала, например стеклянную
 трубку, начать пропускать электрический ток, то вдоль канала установится
 определенный градиент напряжения, т. е. сформируется электрическое по-
ле. Его напряженность измеряется разностью потенциалов по концам ра-
бочего канала (или его участка), отнесенной к его длине (В/см). Под дейст-
вием поля макромолекулы в соответствии со своим суммарным зарядом
мигрируют в направлении катода или анода, причем их трение об окру-
 жающую среду ограничивает скорость миграции. В зависимости от вели-
чины заряда и размеров молекулы приобретают разные скорости, и в этом –
 сущность процесса электрофореза. Постепенно исходный препарат, состо-
явший из различных молекул, разделяется на зоны одинаковых молекул,
 мигрирующих с одной и той же скоростью. Со временем эти зоны
� распределяются по длине канала.
     Для наблюдения за ходом электрофореза в исходный препарат вносят
краситель, мигрирующий в том же направлении, что и фракционируемые
белки. Он не должен заметным образом связываться с белками, а скорость
его продвижения по гелю должна быть заведомо больше, чем у наиболее
быстро мигрирующего белка. Вместе с тем краситель не должен слишком
сильно отрываться от белков, чтобы его прохождению до конца пластины
или     трубки     соответствовало    использование     большей      части
находящегося в них геля для фракционирования белков. В щелочных и
 нейтральных буферах, когда кислые белки заряжены отрицательно и миг-
 рируют к аноду, а также для любых белков в комплексе с ДДС-Na (см. ни-
 же) используют отрицательно заряженные красители. Наибольшее распро-
 странение получил бромфеноловый синий, имеющий достаточно слож-
ную структуру; в его состав, в частности, входят два дибромфенольных ос-
татка.




                                    18

Страницы