Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 22 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

22
прокрашивания с помощью кумасси близко расположенных друг от друга
белковых полос между ними может остаться окрашенный фон.
Препараты амидо-черного не отличаются постоянством своих харак-
теристик, и результаты окрашивания при использовании различных партий
этого красителя могут быть не похожи друг на друга.
На порядок величины лучшую чувствительность дает окрашивание
белков ионами
серебра. После осаждения белков трихлоруксусной кисло-
той и ацетоном, тщательной промывки ацетоном и водой гель переносят на
8 минут в 0.1%-й раствор AgNO
3
. Затем после отмывки водой в такой же
объем карбоната натрия и 0.02%-й формальдегид. Окрашенные полосы
белка появляются через несколько минут. Механизм окрашивания неясен,
но, по-видимому, он в чем-то сходен с восстановлением серебра в фото-
графическом процессе.
Оборудование и реактивы.
Реакционная смесь 1: 25%-я ХУ, 30%-й этиловый спирт, 200 мг кумас-
си на 100 мл воды.
Реакционная смесь 2: 1 г амидо-черного 10В растворить в 100 мл 7%-й
уксусной кислоты.
Реакционная смесь 3: 58.5 мл 50%-й ацетон, 1.5 мл 50%-й ТХУ, 0.1 мл
формальдегида.
Реакционная смесь 4: 0.1 мл 10% Na
2
S
2
O
3
в 60 мл Н2О. Раствор тио-
сульфата следует готовить непосредственно перед проявлением.
Реакционная смесь 5: 0.12 г AgNO
3, 0.6 мл формальдегида довести до
60 мл Н
2
О.
Реакционная смесь 6: в 60 мл Н
2О внести 1.2 г Na
2
CO
3
, 0.06 мл 10%-го
раствора Na
2
S
2
O
3
, 0.06 мл формальдегида.
Ход работы.
1. Проявление белков с помощью кумасси бриллиантового синего
R-250.
После проведения электрофореза извлечь гелевую пластинку и по-
местить в реакционную смесь 1 на 3–24 часа. Краситель, не связанный с
белком, отмывают 7%-й уксусной кислотой. Для этого раствор красителя
заменяют отмывающим раствором на 1–2 часа, повторяя эту процедуру не-
сколько раз. Хранят отмытый гель в том же растворе, который использо-
вался для его
отмывания. 
прокрашивания с помощью кумасси близко расположенных друг от друга
белковых полос между ними может остаться окрашенный фон.
    Препараты амидо-черного не отличаются постоянством своих харак-
теристик, и результаты окрашивания при использовании различных партий
этого красителя могут быть не похожи друг на друга.
    На порядок величины лучшую чувствительность дает окрашивание
белков ионами серебра. После осаждения белков трихлоруксусной кисло-
той и ацетоном, тщательной промывки ацетоном и водой гель переносят на
8 минут в 0.1%-й раствор AgNO3. Затем после отмывки водой в такой же
объем карбоната натрия и 0.02%-й формальдегид. Окрашенные полосы
белка появляются через несколько минут. Механизм окрашивания неясен,
но, по-видимому, он в чем-то сходен с восстановлением серебра в фото-
графическом процессе.
    Оборудование и реактивы.
    Реакционная смесь 1: 25%-я ХУ, 30%-й этиловый спирт, 200 мг кумас-
си на 100 мл воды.
    Реакционная смесь 2: 1 г амидо-черного 10В растворить в 100 мл 7%-й
уксусной кислоты.
    Реакционная смесь 3: 58.5 мл 50%-й ацетон, 1.5 мл 50%-й ТХУ, 0.1 мл
формальдегида.
    Реакционная смесь 4: 0.1 мл 10% Na2S2O3 в 60 мл Н2О. Раствор тио-
сульфата следует готовить непосредственно перед проявлением.
    Реакционная смесь 5: 0.12 г AgNO3, 0.6 мл формальдегида довести до
60 мл Н2О.
    Реакционная смесь 6: в 60 мл Н2О внести 1.2 г Na2CO3, 0.06 мл 10%-го
раствора Na2S2O3, 0.06 мл формальдегида.
    Ход работы.
    1. Проявление белков с помощью кумасси бриллиантового синего
R-250. После проведения электрофореза извлечь гелевую пластинку и по-
местить в реакционную смесь 1 на 3–24 часа. Краситель, не связанный с
белком, отмывают 7%-й уксусной кислотой. Для этого раствор красителя
заменяют отмывающим раствором на 1–2 часа, повторяя эту процедуру не-
сколько раз. Хранят отмытый гель в том же растворе, который использо-
вался для его отмывания.



                                   22

Страницы