Очистка ферментов и методы исследования их каталитических свойств. Климова А.Т. - 27 стр.

         Работа 2. Определение зависимости скорости реакции от
                             температуры

     Скорость ферментативной реакции повышается в 1,5–2,2 раза с повы-
шением температуры на 10 оС. Поэтому такого понятия, как «температур-
ный оптимум активности», не существует. Вместе с тем в условиях
экcперимента существует определенное значение температуры, при кото-
ром активность фермента максимальна; дальнейшее увеличение темпера-
туры приводит к снижению скорости реакции. Следует иметь в виду, что
это происходит в результате денатурации части фермента. Оптимальная
температура действия фермента зависит от соотношения между влиянием
температуры на скорость ферментативной реакции, с одной стороны, и на
скорость денатурации фермента – с другой.
     Оборудование и реактивы.
     Водяная баня, термостат, пробирки, спектрофотометр, раствор слюны,
йод, 1%-й раствор крахмала.
     Ход работы.
     1. Исследование влияния температуры на активность амилазы слюны.
     В 4 пробирки наливают по 5 мл 1%-го раствора крахмала. Первую
пробирку помещают в кипящую водяную баню, вторую – в термостат при
40 оС, третью оставляют при комнатной температуре, четвертую помеща-
ют на лед. Через 10 минут во все пробирки, оставляя их в тех же условиях,
прибавляют по 1 мл раствора слюны и перемешивают. Гидролиз крахмала
наблюдают в реакции с йодом. Для этого на стеклянную пластинку нано-
сят несколько капель раствора йода и смешивают их с каплями смеси, ко-
торую отбирают из каждой пробирки через 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 мин. По из-
менению окрашивания раствора крахмала с йодом судят о степени гидро-
лиза в каждой пробирке. В пробирке, которая содержалась на водяной бане
при 100 оС, смесь окрашивается в синий цвет, поскольку фермент инакти-
вирован, и гидролиз крахмала здесь не происходит. В других пробирках
окраска зависит от степени гидролиза крахмала: в пробирке, находившейся
в термостате, раствор приобретает желтый цвет, в третьей и четвертой –
красный или фиолетово-красный. Сделать вывод о влиянии температуры
на скорость протекания биохимической реакции.



                                   27