Физико-химические методы в органической химии. Крысин М.Ю - 8 стр.

                                      8
тяжести при атмосферном давлении, либо элюент подают под некоторым
избыточным давлением. Менее эффективным является создание незначительного
вакуума снизу колонки. Для колоночной хроматографировании используют труб-
ки с впаянной пористой стеклянной пластинкой, либо в нижнюю часть колонки
помещают небольшой тампон из ваты (стекловаты), на которую насыпают слой
песка толщиной 1 см (рис. 5).
     Заполнение колонки («мокрый» метод). Наиболее оптимальные результаты
получаются при использовании адсорбентов с размером частиц 0,04 – 0, 08 мм.
Колонку заполняют предварительно приготовленной густой суспензией сорбента
в неполярном растворителе. По мере оседания адсорбента в колонку периодиче-
ски подают некоторое количество растворителя, одновременно постукивая по
стенке отрезком вакуумного шланга для более однородного заполнения. Если
уровень сорбента остается неизменным, то заполнение можно считать закончен-
ным.
     Ни в коем случае нельзя допускать высыхания адсорбента. Уровень элю-
ента над сорбентом должен составлять 4 - 7 мм (в зависимости от диаметра ко-
лонки). Перед введением пробы в колонку помещают кружок из фильтровальной
бумаги диаметром несколько меньшим внутреннего диаметра колонки.
     Способы введения пробы.
     1. Пробу растворяют в неполярном растворителе, чтобы получить концен-
трированный раствор, который затем пипеткой вводят в хроматографическую ко-
лонку. Сосуд, в котором была растворена проба, и пипетку споласкивают не-
большим количеством растворителя, который также вводят в колонку. Когда вве-
денный раствор впитается, начинают хроматографирование. Если объем раствора
пробы достаточно большой, то ввод проводят по частям, но зона нанесенной сме-
си должна быть как можно более узкой.
     2. Если проба только частично растворима или почти нерастворима в непо-
лярном растворителе, то ее растворяют в минимальном количестве полярного
растворителя и полученный раствор разбавляют неполярным растворителем. Если
при этом часть пробы выпадает в осадок, то в колонку вводят жидкий слой и по-
вторяют ту же операцию. Зона ввода также должна быть минимальной.
     3. Если проба слишком вязкая или это смесь соединений самой различной
полярности, то ее растворяют в возможно более летучем полярном растворителе,
полученный раствор смешивают с адсорбентом, который использовался при за-
полнении колонки. После испарения растворителя в вакууме при комнатной тем-
пературе, остаток смешивают с сухим адсорбентом и вводят его сверху в колонку
тем способом, каким проводилось ее первоначальное заполнение.
     Хроматографирование. Для лучшей сорбции после введения пробы в колон-
ку подают некоторое количество растворителя. Операцию повторяют 2 – 3 раза.
При разделении многокомпонентных смесей элюирование обычно начинают наи-
менее полярным растворителем. Скорость отбора и объем фракций зависит от ти-
па и масштаба хроматографического процесса. Отобранные в течение определен-
ных интервалов фракции анализируют методом ТСХ и при необходимости объе-
диняют. Из объединенных фракций отгоняют растворитель посредством обычной
перегонки или на роторном испарителе в вакууме. Процесс продолжают до тех