Методические указания для самостоятельной подготовки к лабораторным занятиям по биологической химии. Пластинина З.А - 30 стр.

освобождения    белковых    растворов    от     солей   обычно   удалить пузырьки воздуха. Затем в колонку через воронку
используют сефадекс марки G-25.                                  вливают густую суспензию геля сефадекса.
                                                                 Ход работы. 1. Нанесение раствора белка. Колонка при-
Материал для исследования. Яичный альбумин, 1 % раствор.         готовлена заранее. Перед нанесением раствора открывают
Реактивы. Биуретовый реактив; хромат калия К2СгО4, сухой         кран на колонке и наблюдают за уменьшением столбика
порошок; гель сефадекса G-25; дистиллированная вода.             воды над слоем сефадекса. Как только над поверхностью
Оборудование. Колонка с краном размером 1 х 25 см;               геля остается слой жидкости толщиной 1—2 мм, кран за-
делительные воронки или склянки с тубусом; воронки,              крывают и при помощи пипетки аккуратно наносят на гель 1
химические   стаканы;   стеклянные    палочки;    штативы   с    мл белкового раствора, в который предварительно добавляют
пробирками; пипетки на 1 мл; стеклянная вата.                    5 мг К2СгО4. Кран открывают и следят за проникновением
1. Приготовление геля: 4 г порошка сефадекса G-25                раствора в гель. Снова закрывают кран, стенки колонки
суспендируют в 200 мл дистиллированной воды в химическом         ополаскивают 1 мл дистиллированной воды при помощи
стакане. После отстаивания основной массы порошка воду с         пипетки, открывают кран и позволяют жидкости впитаться в
мелкими частицами осторожно сливают. Эту процедуру               гель. Затем кран закрывают и, стараясь не взмучивать гель,
повторяют до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет       добавляют из пипетки аккуратно по стенке 4—6 мл
прозрачной. При комнатной температуре весь процесс полного       дистиллированной воды.
набухания геля занимает 3 ч. Если нагреть суспензию на           2. Сбор фракций. В 14 пробирок отмеривают по 1 мл
водяной бане до температуры 100 "С, то это время сокращается     биуретового реактива. К колонке присоединяют дели-
до 1 ч.                                                          тельную воронку с водой и открывают кран. Собирают
2. Подготовка колонки: в колонку с закрытым краном наливают      фракции с колонки по 20 капель (1 мл) в пробирки, со-
небольшое количество дистиллированной воды. На дно колонки       держащие биуретовый реактив. Наблюдают изменение
помещают кусочек стеклянной ваты, при этом необходимо            окраски на фиолетовую в порциях элюата, содержащего
                                                                 белок.