Методические указания для самостоятельной подготовки к лабораторным занятиям по биологической химии. Пластинина З.А - 33 стр.

месте.   На   этом      принципе   разработан       ряд    методов    Ход работы:       На полосках хроматографической бумаги
электрофоретического       разделения     белков,     ферментов,      размером
аминокислот и других веществ, обладающих зарядом;                     3 X 26 см делают простым карандашом отметки на расстоя-
величина и знак заряда зависят от природы белка, рН и                 нии 7 см от каждого конца. Бумажные полоски смачивают
ионной силы используемого буферного раствора. В качестве              буферным        раствором,     немного          подсушивают    на
адсорбента      применяют     хроматографическую            бумагу,   фильтровальной бумаге и закладывают в камеру для
силикагель, агар, крахмал и т. п. Рассматриваемым методом             электрофореза. В электродные кюветы наливают буферный
можно получить до 9 фракций белков, содержащихся в                    раствор,    отделения        кювет         соединяют   полосками
сыворотке крови.                                                      фильтровальной бумаги. После этого на место отметки на
                                                                      каждой полоске наносят из микропипетки 0,01 мл сыворотки
Оборудование: ФЭК, СФ или денситометр; камера для
электрофореза      со    стабилизатором     и     выпрямителем;       в виде тонкой полосы, не доходящей до края с каждой

холодильник; сушильный шкаф; весы; ножницы; деревянная                стороны на 2 мм. Крышку камеры закрывают и включают

рама;    хроматографическая    бумага;    линейка;        карандаш;   электрический ток. Электрофорез проводят при градиенте

вазелиновое     масло;    фильтровальная        бумага;     кнопки;   потенциала 4—6 В/см. Например, если длина бумаги равна

карандаш по стеклу; кюветы; пробирки; микропипетки;                   26 см, градиент потенциала 5 В/см, то напряжение составит
                                                                      26Х5==130 В. Сила тока должна соответствовать 0,1—0,3 мА
пипетки на 10 мл.
                                                                      на каждый сантиметр бумажной полосы. Работу проводят
Реактивы: 0.05 М трис-НС1-буфер рН 8,9; проявитель
                                                                      при   4°С   в    холодильнике        или    в   холодной   камере.
(растворяют в воде 0,1 г бромфенолового синего, 50 г ZnSO 4
                                                                      Продолжительность электрофореза составляет 18—24 ч. По
* 7H 2 O и 50 мл ледяной уксусной кислоты и доводят водой
                                                                      окончании электрофореза бумажные полоски вынимают из
до 1 л); 2%-ный раствор уксусной кислоты (20 мл ледяной
                                                                      прибора (концы полосок по 7 см с каждой стороны
уксусной кислоты, воды до 1 л); 0,01 н. раствор NaOH.
                                                                      отрезают), закрепляют на деревянной раме и помещают на 15
Материал: сыворотка крови.
                                                                      мин в сушильный шкаф при 100° С. Высушенные полоски