Методические указания для самостоятельной подготовки к лабораторным занятиям по биологической химии. Пластинина З.А - 34 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

кладут в сухие кюветы, заливают раствором проявителя
(бромфеноловый синий) и оставляют на 8—20 ч.
Избыток краски удаляют путем промывания бумажных
полосок 2%-ным раствором уксусной кислоты до тех пор,
пока их фон не станет белым. Затем полоски вывешивают на
раме и сушат при комнатной температуре. После
высушивания на электрофореграммах обнаруживаются 5
окрашенных полос различных фракций белков:
( см. рис. 11) первая слева интенсивно окрашенная полоса —
альбуминов, вторая, наименее окрашенная, — α
1
-
глобулинов, третья — α
2
-глобулинов, четвертая — β-
глобулинов и, наконец, пятая (крайняя справа) — γ-
глобулина.
Количественное определение каждой фракции белков
проводят с использованием денситометра или путем
извлечения краски из бумаги и определения ее количества. В
последнем случае разрезают электрофореграммы па участки,
соответствующие отдельным фракциям. Каждый участок
измельчают и помещают в отдельные пробирки, в которые
приливают по 10 мл элюирующего раствора 0,01 н. NaOH.
Для определения фона вырезают полоску бумаги шириной 2
см из участка, свободного от белка, и также заливают
элюирующим раствором. Элюцию проводят в течение 30
мин, изредка встряхивая пробирки. Окрашенный раствор
колориметрируют на ФЭКе против элюирующего раствора
или на СФ при длине волны 595 нм. Для выяснения истинной
оптической плотности каждой фракции (D
α
) из полученных
цифровых значений оптической плотности вычитают
величину оптической плотности фона с учетом ширины
фракций на бумаге по формуле:
D
α
= D
1
- D
0 *
l
1
/ l
2
,
где D
1
— измеренная оптическая плотность; Do
— оптическая плотность фона; l
1
— ширина полоски
фракции, см;
l
2
— ширина полоски фона, см.
Величины истинной оптической плотности всех фракций
складывают, сумму принимают за 100% и затем вычисляют
процентное содержание каждой фракции белков по формуле:
B = D
α*
100 / Σ D,
где D
α
— оптическая плотность анализируемой
фракции; Σ D — сумма оптических плотностей всех
фракций.
Зная абсолютное содержание общего белка сыворотки (в
данном объеме), легко вычислить и абсолютное содержание
каждой фракции по формуле: 
кладут в сухие кюветы, заливают раствором проявителя             мин, изредка встряхивая пробирки. Окрашенный раствор
(бромфеноловый синий) и оставляют на 8—20 ч.                     колориметрируют на ФЭКе против элюирующего раствора
    Избыток краски удаляют путем промывания бумажных             или на СФ при длине волны 595 нм. Для выяснения истинной
полосок 2%-ным раствором уксусной кислоты до тех пор,            оптической плотности каждой фракции (Dα) из полученных
пока их фон не станет белым. Затем полоски вывешивают на         цифровых   значений      оптической       плотности   вычитают
раме   и     сушат   при   комнатной    температуре.   После     величину оптической плотности фона с учетом ширины
высушивания на электрофореграммах обнаруживаются 5               фракций на бумаге по формуле:
окрашенных полос различных фракций белков:
( см. рис. 11) первая слева интенсивно окрашенная полоса —                           Dα = D1 - D0 * l1 / l2 ,
альбуминов, вторая, наименее окрашенная, — α             1   -                  где D1— измеренная оптическая плотность; Do
глобулинов, третья — α      2   -глобулинов, четвертая — β-      — оптическая плотность фона; l1 — ширина полоски
глобулинов и, наконец, пятая (крайняя справа) — γ-               фракции, см;
глобулина.                                                       l2 — ширина полоски фона, см.
       Количественное определение каждой фракции белков          Величины истинной оптической плотности всех фракций
проводят     с   использованием   денситометра   или   путем     складывают, сумму принимают за 100% и затем вычисляют
извлечения краски из бумаги и определения ее количества. В       процентное содержание каждой фракции белков по формуле:
последнем случае разрезают электрофореграммы па участки,                                 B = Dα* 100 / Σ D,
соответствующие отдельным фракциям. Каждый участок                              где Dα — оптическая плотность анализируемой
измельчают и помещают в отдельные пробирки, в которые            фракции;   Σ D — сумма оптических плотностей всех
приливают по 10 мл элюирующего раствора 0,01 н. NaOH.            фракций.
Для определения фона вырезают полоску бумаги шириной 2              Зная абсолютное содержание общего белка сыворотки (в
см из участка, свободного от белка, и также заливают             данном объеме), легко вычислить и абсолютное содержание
элюирующим раствором. Элюцию проводят в течение 30               каждой фракции по формуле:

Страницы