Составители:
Рубрика:
А.Ф.Сайфитдинова 45
исследователь не оставляет возможности провести дополнительный раунд
амплификации сигнала в случае, если такая необходимость возникнет. Поэтому
иногда этап обезвоживания и высушивания пропускают. Готовый препарат
заключают в фотозащитную среду и исследуют под микроскопом.
Преимуществом непрямого метода детекции репортерных молекул в
составе гибридизованного зонда является возможность усиления
флуоресцентного сигнала иммунохимическими методами. В самом простом
случае последовательно используются иммуноглобулины, конъюгированные с
флуорохромами, причем каждое следующее антитело специфически распознает
предыдущее (Рисунок 2.2).
флуорохром
III антитело против II антител
флуорохром
II антитело против I антител
флуорохром
I антитело против гаптена
гаптен
гибрид зонда и нуклеиновой кислоты на препарате
Рисунок 2.2. Схема усиления сигнала иммунохимическим методом.
Эффективность усиления сигнала в такой системе возрастает
пропорционально количеству раундов амплификации, но при этом
увеличивается неспецифический фон. Еще одним недостатком этого метода
является его дороговизна, т.к. необходимо приобрести несколько конъюгатов,
последовательно взаимодействующих друг с другом.
Система на основе авидина, конъюгированного с флуорохромом, и
биотинилированных антител к авидину, позволяет проводить многократную
амплификацию, используя только два
вида конъюгатов (Рисунок 2.3).
флуорохром
авидин
биотин
антитело против авидина
флуорохром
авидин 3 цикла детекции
биотин
антитело против авидина 2 цикла детекции
флуорохром
авидин 1 цикл детекции
биотин
гибрид зонда и нуклеиновой кислоты на препарате
Рисунок 2.3. Схема усиления сигнала в системе биотин-авидин.
Кроме того, дополнительное усиление сигнала
происходит за счет
способности авидина связывать сразу 4 молекулы биотина, что приводит к
образованию сложных структур, содержащих множество флуорохромов. Тем не
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 46
- 47
- 48
- 49
- 50
- …
- следующая ›
- последняя »
