Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 12 стр.

T – время реакции, с,
L – толщина слоя, см,
С – содержание белка в пробе, мг (см. гл. 5.2.).
      Измерение активности аскорбатпероксидазы проводят в нескольких (не
менее трёх) биологических и аналитических повторностях. Стандартную
ошибку вычисляют в программе Microsoft Office Excel (опция «Описательная
статистика»).


                   1.3. Определение активности каталазы
      Для определения активности каталазы (ЕС 1.11.1.6) используют
спектрофотометрический метод, предложенный Эби (Aeby, 1984). Метод
основан на определении скорости разложения перекиси водорода каталазой
исследуемого образца с образованием воды и кислорода.
                           Необходимые реактивы:
1) 50 мМ K,Na-фосфатный буфер (рН 7,8).
2) 50 мМ K,Na-фосфатный буфер (рН 7,0).
      Буферы готовят из следующих сток-растворов:
0,2 М КН2РО4 (1,36 г КН2РО4 растворить и довести до 50 мл).
0,2 М NaOH (400 мг NaOH растворить довести до 50 мл).
      Приготовление 50 мМ K,Na-фосфатного буфера, рН 7,8:
      25 мл 0,2 М КН2РО4 и 22,25 мл 0,2 М NaOH смешать и довести до 100 мл
дистиллированной водой. Проверить и скорректировать рН раствора с
помощью концентрированной H3PO4 или 5% NaOH.
      Приготовление 50 мМ K,Na-фосфатного буфера, рН 7,0:
      25 мл 0,2 М КН2РО4 и 14,55 мл 0,2 М NaOH смешать и довести до 100 мл
дистиллированной водой. Проверить и скорректировать рН раствора.
3) экстракционный буфер (к 2 мл 50 мМ K,Na-фосфатного буфера (рН 7,8)
добавить 20 мкл раствора 100 мМ фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ)).
4) 0,6 М перекись водорода (3 мл 3% перекиси водорода довести до 4,5 мл
дистиллированной водой).

                                           12