Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 13 стр.

                                  Ход работы
        Навеску каллусной ткани массой 250 мг растереть в охлажденной ступке
в 0,5 мл экстракционного буфера. Гомогенат центрифугировать в течение 5
мин при 12 000 g. Пробы поместить в холодильник (4 °С).
        Реакционная смесь содержит:
        2,95 мл 50 мМ K,Na-фосфатного буфера (рН 7,0)
        30 мкл экстракта
        Реакция запускается внесением в реакционную смесь 20 мкл 0,6 М
перекиси водорода.
        Контрольная кювета содержит те же реактивы, НО! в нее не вносится
перекись водорода.
       Активность каталазы определяют по изменению оптической плотности
при длине волны 240 нм ежесекундно в течение 100 с.
                                    Расчёты
       Расчет активности каталазы в относительных единицах на один грамм
сухого веса проводить по формуле:
                              A = (ΔD•V•X)/(T•L•m•Δm),
где:
А – активность фермента,
ΔD – изменение оптической плотности (вычесть из оптической плотности в
        начале реакции оптическую плотность в конечный момент времени),
V – общий объём полученной вытяжки, мл,
X – конечное разведение вытяжки в кювете (объём реакционной смеси
        разделить на количество вносимого экстракта),
T – время реакции, с,
L – толщина слоя, см,
m – масса навески, г,
Δm – отношение сухого веса к сырому (см. гл. 5.1.).
       Для определения активности фермента на 1 мг белка используют
следующую формулу:

                                          13