Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 28 стр.

проводят, выставляя напряжение из расчета 2 В/см2, при этом разделение
продолжают спустя 2 часа после того, как лидирующий краситель полностью
вышел из разделяющего геля.
      После    этого   гель   помещают      в    раствор   ферроцианида      калия
(окрашивающий раствор А) с добавлением перекиси водорода (окрашивающий
раствор Б) и оставляют на 20 мин. на шейкере. Затем раствор удаляют, и гель
промывают дистиллированной водой 1 раз. Далее гель помещают в раствор
хлорида железа (окрашивающий раствор В) и интенсивно покачивают.
Происходит изменение окраски геля с жёлтого на тёмно-зелёный, при этом
изоформы каталазы выявляются в виде ярко-жёлтых полос. При появлении
окраски гель переносят в дистиллированную воду и быстро фотографируют или
сканируют.


          2.3. Выявление изоферментных спектров пероксидазы
     Выявление     изоферментов    пероксидазы       проводится,   как    описано
Ермаковым с соавторами (Ермаков и др., 1987). Визуализация изоформ
происходит в виде синих полос на прозрачном геле. Появление полос
обусловлено образованием окрашенного продукта реакции в месте окисления
бензидина в присутствии пероксидазы.
                          Необходимые реактивы:
      Важно:     все    растворы     для        электрофореза      готовят     на
деионизированной воде mQ.
1) 0,5% уксусная кислота (1 мл ледяной уксусной кислоты довести водой до
50 мл).
2) Tpис-глициновый буфер, рН 8,3 (0,6 г Tрис·HCl (трис(гидроксиметил)-
аминометан); 2,34 г глицина, 0,1 г борной кислоты растворить в 1 л воды).
3) бензидиновый реагент (125 мг основного или солянокислого бензидина
растворить в 1 мл ледяной уксусной кислоты и после полного растворения
довести объём водой до 50 мл).
4) 0,1 % раствор перекиси водорода (0,5 мл 3% перекиси водорода добавить к

                                           28