Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 30 стр.

окрашивания геля говорит об отсутствии свободных радикалов, устранение
которых происходит за счет активности супероксиддисмутазы.
                              Необходимые реактивы:
      Важно:       все   растворы         для        электрофореза   готовят       на
деионизированной воде mQ.
1) 50 мМ K,Na-фосфатный буфер, рН 7,8. Для приготовления K,Na-фосфатного
буфера необходимо приготовить следующие сток-растворы:
0,2 М КН2РО4 (1,36 г КН2РО4 довести до 50 мл водой),
0,2 М NaOH (400 мг NaOH довести до 50 мл водой).
      Приготовление 50 мМ K,Na-фосфатного буфера, рН 7,8:
      25 мл 0,2 М КН2РО4 и 22,25 мл 0,2 М NaOH смешать и довести до 100 мл
водой. Проверить рН раствора, и, если необходимо, скорректировать с
помощью концентрированной H3PO4 или 5% NaOH).
2) Tpис-глициновый буфер, рН 8,3 (0,6 г Tрис·HCl (трис(гидроксиметил)-
аминометан); 2,34 г глицина, 0,1 г борной кислоты растворить в 1 л воды).
3) окрашивающий раствор (45 мг ЭДТА-Na и 1 мг рибофлавина растворить в 40
мл 50 мМ K,Na-фосфатного буфера (рН 7,8). Непосредственно перед загрузкой
геля добавить 4 мг нитросинего тетразолия
                                   Ход работы
      Приготовление проб для визуализации изоформ СОД проводят так же,
как это описано в разделе 1.4 (определение активности СОД). Обязательно
определяют содержание белка в пробе (см. гл. 5.2.). Для проведения
электрофореза пробы выравнивают по содержанию белка (обычно около
20 мкг).
      Разделение     белков    проводят    в     10%     полиакриламидном   геле    в
электродном Tрис-глициновом буфере без додецилсульфата натрия (ДСН) по
методу Лэммли (Laemmli, 1970). Разделение проводят при 4 °С, останавливая
процесс разделения сразу после того, как лидирующий краситель полностью
выйдет из разделяющего геля и пробки.
      После электрофореза гель помещают в окрашивающий раствор и

                                                30