Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 32 стр.

20 мг 2,6 дихлорофенолиндофенол (DCIP) и 20 мг 3-(4,5-диметил-2-тиазолил)-
2,5-дифенил-2-тетразолиум бромид (MTT).
                                 Ход работы
     Экстрагирование проб для визуализации изоформ глутатионредуктазы
проводят так же, как в методике определения активности глутатионредуктазы
(см. раздел 1.5.). Обязательно определяют содержание белка в пробе (см.
гл. 5.2.). Для проведения электрофореза пробы выравнивают по содержанию
белка (обычно около 20 мкг).
     Электрофорез     проводят    в   10%     полиакриламидном     геле   в
неденатурирующих условиях согласно методике Лэммли (Laemmli, 1970),
исключая додецилсульфата натрия (ДСН)из всех растворов. Разделение
проводят, выставляя напряжение из расчета 2 В/см2 геля, при 4 °С, в качестве
электродного буфера используют Трис-глициновый буфер (рН 8,3).
     После электрофореза гель инкубируют в окрашивающем растворе при
покачивании в темноте до появления темно-фиолетовых полос. Гель
фотографируют или сканируют.




                                       32