Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 36 стр.

UptoLike

Рубрика: 

36
К – содержание восстановленной формы глутатиона, мкмоль/ г сух веса.
Измерение активности глутатиона проводят в нескольких (не менее трёх)
биологических и аналитических повторностях. Стандартную ошибку
вычисляют в программе Microsoft Office Excel (опция «Описательная
статистика»).
3.2. Определение суммы растворимых фенольных соединений
Определение содержания растворимых полифенолов проводят по методу
Фолина и Чокальтеу (Folin, Ciocoalteu, 1927) в модификации Синглетона и
Росси (Singleton, Rossi, 1965). Метод основан на реакции фенолов с реактивом
Фолина-Чокальтеу. Реактив состоит из солей фосфорновольфрамовой и
фосфорномолибденовой кислот. В щелочной среде эти соли при
взаимодействии с фенолами и полифенолами восстанавливаются с
образованием окрашеных в синий цвет комплексов, содержание которых
оценивается спектрофотометрически.
Необходимые реактивы:
1) водный раствор Na
2
CO
3
, (75 г/л).
2) реактив Фолина-Чокальтеу. Развести в дистиллированной воде (обычно 1/10,
т.е. 1 мл реактива Фолина-Чокальтеу довести до 10 мл).
3) 80% этанол.
Приготовление реактива Фолина-Чокальтеу:
100 г вольфрамата натрия (Na
2
WO
4
·2Н
2
О), 25 г молибдата натрия
(Na
2
MoO
4
·2Н
2
О) и 700 мл дистиллированной воды поместить в круглодонную
колбу. Добавить 50 мл фосфорной кислоты (85%) и 100 мл концентрированной
соляной кислоты. Присоединить обратный холодильник и осторожно кипятить
в течение 10 часов. Затем добавить 150 г сульфата лития (Li
2
SO
4
), 50 мл воды и
несколько капель жидкого брома (Br
2
). Убрать дефлегматор и продолжать
кипятить ещё 15 мин для удаления излишков брома. Охладить, довести объём
до 1 л и профильтровать. Полученный реактив не должен иметь зеленоватой
окраски, т.к. это означает наличие в нём продуктов реакции восстановления
К – содержание восстановленной формы глутатиона, мкмоль/ г сух веса.
     Измерение активности глутатиона проводят в нескольких (не менее трёх)
биологических    и    аналитических           повторностях.    Стандартную    ошибку
вычисляют в программе Microsoft Office Excel (опция «Описательная
статистика»).


       3.2. Определение суммы растворимых фенольных соединений
     Определение содержания растворимых полифенолов проводят по методу
Фолина и Чокальтеу (Folin, Ciocoalteu, 1927) в модификации Синглетона и
Росси (Singleton, Rossi, 1965). Метод основан на реакции фенолов с реактивом
Фолина-Чокальтеу. Реактив состоит из солей фосфорновольфрамовой и
фосфорномолибденовой      кислот.         В     щелочной      среде   эти   соли    при
взаимодействии    с   фенолами        и       полифенолами      восстанавливаются     с
образованием окрашеных в синий цвет комплексов, содержание которых
оценивается спектрофотометрически.
                          Необходимые реактивы:
1) водный раствор Na2CO3, (75 г/л).
2) реактив Фолина-Чокальтеу. Развести в дистиллированной воде (обычно 1/10,
т.е. 1 мл реактива Фолина-Чокальтеу довести до 10 мл).
3) 80% этанол.
     Приготовление реактива Фолина-Чокальтеу:
     100 г вольфрамата натрия (Na2WO4·2Н2О), 25 г молибдата натрия
(Na2MoO4·2Н2О) и 700 мл дистиллированной воды поместить в круглодонную
колбу. Добавить 50 мл фосфорной кислоты (85%) и 100 мл концентрированной
соляной кислоты. Присоединить обратный холодильник и осторожно кипятить
в течение 10 часов. Затем добавить 150 г сульфата лития (Li2SO4), 50 мл воды и
несколько капель жидкого брома (Br2). Убрать дефлегматор и продолжать
кипятить ещё 15 мин для удаления излишков брома. Охладить, довести объём
до 1 л и профильтровать. Полученный реактив не должен иметь зеленоватой
окраски, т.к. это означает наличие в нём продуктов реакции восстановления

                                                36