Хроматографические методы в анализе лекарственных и токсичных веществ. Стоянова О.Ф - 43 стр.

                                          43
        П од готов капластины д ля Т СХ
        П ластинуд ля Т СХ марки “ Силуфол”, “ А рмсорб” или аналогичную
клад утнастол и просты м каранд аш ом, без нажима, легкопров од я тлинию,
параллельную нижнем украю пластины на расстоя нии 1,5 см от края . Э та
линия наз ы в ается «линией старта». Н алинии стартакаранд аш ом намечают
4 точки, рав ноотстоя щ ие д руготд руг        а и от краев пластины . Ж елательно,
чтобы расстоя ние межд у точками бы ло не менее 1,5 см. Раз метку
пластины пров од я таккуратно, не наруш ая слой силикаг          еля .
         Н анесение проб напластину
        В намеченны е точки м икрош прицем на 10 мкл нанося т
приг  отов ленны е раств оры в след ующ ем поря д ке: в о 2 точку – 2,5 мкл
раств ора исслед уемого в ещ еств а (из ониаз ид а); в 1,3 и 4 точки – 0,5, 1,
2 мкл раств ора примеси (г      ид раз ина сульфата), чтоэ кв ив алентно2,5; 5,0 и
10 мкгг    ид раз инасоотв етств енно.
        Н анесение проб пров од я т лег     ким прикоснов ением в ы д ав ленной из
иг лы капли к точке на пластине. Н ужны й объем нанося т не сраз у, а в
несколькокасаний так, чтобы д иаметр получив ш ег             ося на пластине пя тна
бы л как можно меньш е и не прев ы ш ал 0,5 см. П осле кажд ог              о касания
пя тно под суш ив ают и только после э тог           о нанося т след ующ ую порцию
раств ора.
        К огд а в се 4 пробы буд ут нанесены и пя тна под сохнут, пластина
готов ад ля пров ед ения хроматог     рафиров ания .
        П ров ед ение хроматографиров ания
        П ластинус нанесенны м и пробами помещ ают в камеруд ля Т СХ так,
чтобы линия старта с нанесенны ми пя тнам и бы ла в ы ш е уров ня э люента.
К амеруз акры в ают кры ш кой и жд ут, ког         д а э люент под нимется примерно
на 2/3 в ы соты пластины . П ластину в ы нимают из камеры , отметив
каранд аш ом в ы сотупод ъемафронтаэ люента, и суш атнав оз д ухе.
        П роя в ление хроматограммы
        Д ля проя в ления з он компонентов пластинуобрабаты в аютреаг           ентом
при помощ и пульв ериз атора.                 Д етектирующ им       реагентом     д ля
опред еля ем ы х         в ещ еств       я в ля ется        1%       раств ор       п-
д иметилам инобенз альд ег     ид ав 95%-ном э тилов ом спирте. П осле обработки
пластинусуш ат при температуре 100-105 оС в термостате в течение 5 мин.
Зоны анализ ируемого в ещ еств а и примесей проя в ля ются на пластине в
в ид е пя тен кирпично-красног     оцв ета.
        К ачеств енная обработкахроматог         раммы
        Н а хроматог    рамме анализ ируемог       о в ещ еств а обнаружив ается не
менее д в ух пя тен. О д но из них д олжно соотв етств ов ать основ ном у
в ещ еств у– из ониаз ид у. В торое – примеси гид раз ина.
        П ров од я т качеств енны й анализ хроматог        раммы – ид ентифицируют
з оны основ ног    ов ещ еств а и примеси пов еличине Rf. Rf в сех проя в ив ш ихся
з он на хроматог    рамме рассчиты в ают как отнош ение в ы соты под ъемаз оны
компонента (расстоя ние от линии старта д о центра пя тна) к в ы соте
под ъема фронта э люента (расстоя ние от линии старта д олинии фронта).
В ы соты из меря ют линейкой и в ы ражают в од инаков ы х ед иницах д лины