Биотехнология: Монография. Волова Т.Г. - 119 стр.

UptoLike

Составители:

Рубрика:

118

скими фотометрическими методами регистрации, принципиально новые

методы – электрохимические, био- и хемолюминесцентные.

Ферментный анализ относится к кинетическим методам анализа, при

котором искомое вещество определяют по скорости реакции, пропорцио-

нальной концентрации определяемого вещества. Например, при превра-

щении вещества А в продукт Р: А

→ P, концентрация последнего будет

нарастать во времени, при этом начальная скорость реакции v

пропор-

циональна концентрации А: v

= k [А], где k – константа скорости реакции.

Чем выше исходная концентрация определяемого вещества, тем больше

начальная скорость реакции. Предварительно построенный калибровоч-

ный график зависимости v

от [А] позволяет определять неизвестные кон-

центрации веществ в анализируемой смеси.

Ферментный электрод – это комбинация датчика, основой которого яв-

ляется ионоселективный электрод с иммобилизованным ферментом. Поня-

тие ферментного электрода ввели Кларк и Лайон в 1962 г.; в то время ис-

пользовали растворимые ферменты. В 1969 г. Гильбо и Монталво впервые

описали потенциометрический

ферментный электрод для определения мо-

чевины, позволявший измерять разность потенциалов, возникающую в сис-

теме при отсутствии внешнего напряжения. Иммобилизованный фермент в

конструкции электрода первыми применили Апдайк и Хикс в 1971 г., укре-

пив иммобилизованную в геле глюкозооксидазу на поверхности полярогра-

фического кислородного датчика (датчик вольтометрического или ампер-

метрического типа позволяет измерять ток

при наложении постоянного на-

пряжения). С тех пор разработано свыше 100 различных конструкций фер-

ментных электродов, некоторые из них представлены в табл. 3.7.