Большой практикум по биоэкологии. Ч. 1. Воскресенская О.Л - 70 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

МарГУ | Йошкар-Ола

Составители: 

Рубрика: 

70
8 мг - а
1000 мг (1 г) - х
а
а
х 125
8
1000
Таким образом, в данном случае в формулу вместо Е ставится 125.
1. Результаты измерений и расчетов записывают в таблицу25.
Таблица 25
Определение активности пероксидазы
Объект
Навеска, г
Объем экс-
тракта, мл
Разведение
вытяжки в
реакционной
смеси
Активность
фермента
6.2.2. Определение активности полифенолоксидазы (I.I0.3.1)
Полифенолоксидаза – медьсодержащий фермент, катализирует
окисление орто-дифенолов в присутствии кислорода с образованием
воды и орто-хинонов. Ферментная система окисляет также монофенолы.
Принцип метода определения активности полифенолоксидазы тот же,
что и для пероксидазы.
Реактивы и оборудование:
1%-ный раствор парокатехина (готовят
перед определением); 0,01–0,02%-ный
раствор парафенилендиамина на 0,01н
щавелевой кислоте (можно использо-
вать диметилпарафенилендиамин, ко-
торый растворяют в воде); фосфатный
буферный раствор (рН=7,0–7,5); мер-
ные колбы на 25 мл (5 шт.); пипетки на
2 мл; фарфоровые ступки с пестиком;
секундомер; центрифуга с пробирками;
ФЭК.
Ход работы
1. Предварительно взвешенную навеску массой 0,5-1 г расти-
рают в ступке с фосфатным буфером (pH=7,0–7,4), переносят в мерную
колбу на 25 мл и доводят дистиллированной водой до метки. Раститель-
ную вытяжку центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об./мин. Цен-
трифугирование можно заменить фильтрованием.
2. Для определения активности фермента берут две кюветы
толщиной 2 см. В каждую кювету вносят по 2 мл вытяжки и 2 мл воды
или буферного раствора, 2 мл раствора парафенилендиамина. 
                    8 мг - а                       1000 а
                1000 мг (1 г) - х                х             125 а
                                                       8
         Таким образом, в данном случае в формулу вместо Е ставится 125.
         1. Результаты измерений и расчетов записывают в таблицу25.
                                                                   Таблица 25
                  Определение активности пероксидазы
Объект     Навеска, г     Объем экс-      Разведение   Время, с    Активность
                          тракта, мл      вытяжки в                 фермента
                                         реакционной
                                            смеси



              6.2.2. Определение активности полифенолоксидазы (I.I0.3.1)

      Полифенолоксидаза – медьсодержащий фермент, катализирует
окисление орто-дифенолов в присутствии кислорода с образованием
воды и орто-хинонов. Ферментная система окисляет также монофенолы.
Принцип метода определения активности полифенолоксидазы тот же,
что и для пероксидазы.
         Реактивы и оборудование:
1%-ный раствор парокатехина (готовят
перед определением); 0,01–0,02%-ный
раствор парафенилендиамина на 0,01н
щавелевой кислоте (можно использо-
вать диметилпарафенилендиамин, ко-
торый растворяют в воде); фосфатный
буферный раствор (рН=7,0–7,5); мер-
ные колбы на 25 мл (5 шт.); пипетки на
2 мл; фарфоровые ступки с пестиком;
секундомер; центрифуга с пробирками;
ФЭК.

         Ход работы
        1. Предварительно взвешенную навеску массой 0,5-1 г расти-
рают в ступке с фосфатным буфером (pH=7,0–7,4), переносят в мерную
колбу на 25 мл и доводят дистиллированной водой до метки. Раститель-
ную вытяжку центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об./мин. Цен-
трифугирование можно заменить фильтрованием.
        2. Для определения активности фермента берут две кюветы
толщиной 2 см. В каждую кювету вносят по 2 мл вытяжки и 2 мл воды
или буферного раствора, 2 мл раствора парафенилендиамина.


70

Страницы