Большой практикум по биоэкологии. Ч. 1. Воскресенская О.Л - 72 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

МарГУ | Йошкар-Ола

Составители: 

Рубрика: 

72
слойная паренхима и др. Активность фермента зависит от вида расте-
ния, возраста клеток, типа ткани и других факторов.
Методы, используемые для определения активности каталазы
основаны, главным образом, на количестве кислорода, образующегося в
результате действия фермента (Кретович, 1986).
6.2.3.1. Определение активности каталазы
титрометрическим методом
Этот метод анализа получил название перманганатометрия и
используется для определения веществ, обладающих восстановитель-
ными свойствами, в данном случае H
2
O
2
.
Реактивы и оборудование: 0,3% -ный раствор перекиси водорода; 10% -ный
раствор серной кислоты; 0,05н перманганат калия; водяная баня; бюретка для титрования;
ступки; пестики; колбы на 50 мл (5 шт.); стаканы для титрования (15 шт.).
Ход работы:
1. Навеску растительного материала (100–200 мг) растирают в
ступке с водой, переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят дистил-
лированной водой до метки.
2. Растительную вытяжку фильтруют, берут 5 мл отфильтро-
ванного гомогената и инкубируют 10 мин с 5 мл 0,3%-го раствора пере-
киси водорода.
3. Инкубацию прекращают, добавляя 5 мл 10%-ой серной кис-
лоты. Неразложившуюся перекись водорода оттитровывают 0,05н рас-
твором KMnO
4
до появления слабо розовой окраски, не исчезающей в
течение минуты: 5H
2
O
2
+2KMnO
4
+3H
2
SO
4
→K
2
SO
4
+2MnSO
4
+8H
2
O+5O
2
.
4. Контрольную пробу гомогената для инактивации фермента
предварительно прогревают в кипящей водяной бане в течение 5 мин,
затем добавляют 5 мл 0,3%-го раствора перекиси водорода, инкубацию
прекращают добавлением серной кислоты. Оттитровывают перекись
водорода перманганатом калия.
5. Активность каталазы рассчитывают по формуле:
Т
ЕOК 85,0)(
,
где К – количество KMnO
4
, пошедшего на титрование в контроле, мл;
О – количество KMnO
4
, пошедшего на титрование в опыте, мл;
0,85 – количество мл H
2
O
2
, соответствующее 1 мл 0,05н KMnO
4
;
Т – время инкубации (10 мин);
Е – разведение.
Активность каталазы выражают в количестве O
2
, образовавшегося
в результате действия фермента за 1 мин на 1 г сырой массы (мл О
2
·г
-1
·мин
-1
). 
слойная паренхима и др. Активность фермента зависит от вида расте-
ния, возраста клеток, типа ткани и других факторов.
        Методы, используемые для определения активности каталазы
основаны, главным образом, на количестве кислорода, образующегося в
результате действия фермента (Кретович, 1986).
                6.2.3.1. Определение активности каталазы
                         титрометрическим методом
       Этот метод анализа получил название перманганатометрия и
используется для определения веществ, обладающих восстановитель-
ными свойствами, в данном случае H2O2.
          Реактивы и оборудование: 0,3% -ный раствор перекиси водорода; 10% -ный
раствор серной кислоты; 0,05н перманганат калия; водяная баня; бюретка для титрования;
ступки; пестики; колбы на 50 мл (5 шт.); стаканы для титрования (15 шт.).
         Ход работы:
        1. Навеску растительного материала (100–200 мг) растирают в
ступке с водой, переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят дистил-
лированной водой до метки.
        2. Растительную вытяжку фильтруют, берут 5 мл отфильтро-
ванного гомогената и инкубируют 10 мин с 5 мл 0,3%-го раствора пере-
киси водорода.
        3. Инкубацию прекращают, добавляя 5 мл 10%-ой серной кис-
лоты. Неразложившуюся перекись водорода оттитровывают 0,05н рас-
твором KMnO4 до появления слабо розовой окраски, не исчезающей в
течение минуты: 5H2O2+2KMnO4+3H2SO4→K2SO4+2MnSO4+8H2O+5O2.
        4. Контрольную пробу гомогената для инактивации фермента
предварительно прогревают в кипящей водяной бане в течение 5 мин,
затем добавляют 5 мл 0,3%-го раствора перекиси водорода, инкубацию
прекращают добавлением серной кислоты. Оттитровывают перекись
водорода перманганатом калия.
        5. Активность каталазы рассчитывают по формуле:
                              ( К O) 0,85 Е ,
                                           Т
где К – количество KMnO4, пошедшего на титрование в контроле, мл;
     О – количество KMnO4, пошедшего на титрование в опыте, мл;
     0,85 – количество мл H2O2, соответствующее 1 мл 0,05н KMnO4;
     Т – время инкубации (10 мин);
     Е – разведение.
          Активность каталазы выражают в количестве O2, образовавшегося
в результате действия фермента за 1 мин на 1 г сырой массы (мл О2·г-1·мин-1).


72

Страницы