Большой практикум по биоэкологии. Ч. 1. Воскресенская О.Л - 74 стр.

                                                                    Таблица 28
                   Определение активности каталазы
     Варианты    № колб     Навеска, взятая     Показания     Активность каталазы,
      опыта                   для опыта          прибора         мл О2·г-1·мин-1




                  6.2.4. Определение активности аскорбатоксидазы (I.I0.3.3)

        Аскорбатоксидаза катализирует прямое окисление аскорби-
новой кислоты, которая, легко отдавая два иона водорода, превраща-
ется в дегидроформу. Являясь переносчиком водорода, аскорбино-
вая кислота тесно связана со всей системой ферментов, участвующих в
дыхательном метаболизме растительной клетки (Гавриленко, 1975).
         Реактивы и оборудование: 0,005М раствор НСl; 0,005 М раствор MgSO4;
фосфатный буфер рН=6,2; 1,2·10-4М аскорбиновая кислота; дистиллированная вода;
ступки, пестики; колбы на 25 мл (5 шт.); пипетки; воронка; сверла диаметром 12–18
мм; фильтровальная бумага.
         Ход работы:
         1. Навеску растительного материала (0,2–1 г) растирают в фар-
форовой ступке в холодной камере (при температуре 0-4°С), переносят
в мерную колбу на 25 мл и доводят до метки с помощью фосфатного
буфера (рН=7,4). В случае, если расчет необходимо сделать на площадь,
а не на вес, то вырезаются диски из листьев с помощью сверла опреде-
ленного диаметра; в этом случае в анализ берут 15–20 дисков (диамет-
ром 12–18 мм).
         2. После доведения до метки колбу взбалтывают, и всю вы-
тяжку переносят в воронку с обычным фильтром (фильтрацию прово-
дят в холодной камере в течение 5–10 мин).
         3. Фильтрат немедленно фотометрируют, так как активность
фермента снижается при стоянии проб даже в холодной камере.
Определение производят на спектрофотометре в ультрафиолетовой об-
ласти спектра (при длине волны λ=279 нм).
         4. Для определения активности фермента в кюветы приливают:
            контроль                               опыт
0,005М НС1 - 0,1 мл                 0,005М НС1 - 0,1 мл
0,005М MgSO4 - 0,1 мл               0,005М MgS04 - 0,1 мл
фосфатный буфер рН=6,2 - 1,0 мл     фосфатный буфер рН=6,2
                                                         1,0 -мл
                                                               1,0 мл
фильтрат - 1,0 мл                   фильтрат - 1,0 мл
дистиллированная вода - 0,8 мл      1,2·10-4 М аскорбиновая кислота - 0,8 мл


74