Биохимия белков. Яковлева М.Н - 17 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ПетрГУ | Петрозаводск

Составители: 

Рубрика: 

17
устойчивы, нейтральные молекулы белка легко выпадают в
осадок. Вследствие этого определение изоэлектрической точки
может быть сведено к определению pH раствора, при котором
наблюдается наиболее полное и быстрое выпадение белка в
осадок. Для получения растворов с различной величиной
водородного показателя пользуются буферными растворами.
Ход работы.
1. Для определения изоэлектрической точки казеина
в 7 сухих
пробирок наливают последовательно реактивы в количествах
(в мл), указанных в таблице:
№
пробирки
СН
3
СООН
0,2 М
Н
2
О 0,4% р-
р
казеина
в 0,2 М р-ре
СН
3
СООNa
рН
смеси
1 1,6 0,4 0,2 3,8
2 0,8 1,2 0,2 4,1
3 0,4 1,6 0,2 4,4
4 0,2 1,8 0,2 4,7
5 0,1 1,9 0,2 5,0
6 0,06 1,94 0,2 5,3
7 0,03 1,97 0,2 5,6
Растворы тщательно перемешивают. Через 5-10 минут
наблюдается помутнение растворов. Наибольшее количество
осадка наблюдается в той пробирке, где рН соответствует
изоэлектрической точке казеина.
Для определения изоэлектрической точки желатина
в 6 сухих
пробирок последовательно наливают реактивы в количествах
(в мл), указанных в таблице:
№
про-
бир-
ки
Н
2
О
0,1 М
раствор
СН
3
СООН
1М
раствор
СН
3
СООН
0,1М
раствор
СН
3
СООNa
1%
раствор
желати-
на
рН
среды
1 3,8 0,8 - 2,0 2,0 5,6
2 3,5 0,5 - 2,0 2,0 5,3
3 3,0 1,0 - 2,0 2,0 5,0
4 2,0 2,0 - 2,0 2,0 4,7 
устойчивы, нейтральные молекулы белка легко выпадают в
осадок. Вследствие этого определение изоэлектрической точки
может быть сведено к определению pH раствора, при котором
наблюдается наиболее полное и быстрое выпадение белка в
осадок. Для получения растворов с различной величиной
водородного показателя пользуются буферными растворами.
      Ход работы.
     1. Для определения изоэлектрической точки казеина в 7 сухих
 пробирок наливают последовательно реактивы в количествах
 (в мл), указанных в таблице:


       №         СН3СООН            Н 2О    0,4% р-р казеина     рН
   пробирки       0,2 М                        в 0,2 М р-ре     смеси
                                               СН3СООNa
       1               1,6           0,4           0,2          3,8
       2               0,8           1,2           0,2          4,1
       3               0,4           1,6           0,2          4,4
       4               0,2           1,8           0,2          4,7
       5               0,1           1,9           0,2          5,0
       6              0,06          1,94           0,2          5,3
       7              0,03          1,97           0,2          5,6

    Растворы тщательно перемешивают. Через 5-10 минут
наблюдается помутнение растворов. Наибольшее количество
осадка наблюдается в той пробирке, где рН соответствует
изоэлектрической точке казеина.
    Для определения изоэлектрической точки желатина в 6 сухих
 пробирок последовательно наливают реактивы в количествах
(в мл), указанных в таблице:

 №              0,1 М           1М           0,1М       1%       рН
про-   Н2О     раствор        раствор       раствор   раствор   среды
бир-          СН3СООН        СН3СООН       СН3СООNa   желати-
 ки                                                     на
  1    3,8      0,8             -            2,0        2,0      5,6
  2    3,5      0,5             -            2,0        2,0      5,3
  3    3,0      1,0             -            2,0        2,0      5,0
  4    2,0      2,0             -            2,0        2,0      4,7


                                                                   17

Страницы