Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 67 стр.

UptoLike

Рубрика: 

66
натрий лимоннокислый - 2,5г; КН
2
Р0
4
- 2 г; CaCl
2
- 0,2 г; MgS0
4
.
7H
2
0 - 2 г;
FеС1
з
- следы; дистиллированная вода 500 мл. Оба раствора сливают и
доводят объем среды до 1000 мл. Устанавливают рН 7 по индикатору
бромтимоловому синему, который добавляют в среду. Цвет среды должен быть
зеленый. Среду наливают высоким слоем в пробирки, стерилизуют, затем
засевают комочками почвы. Инкубация продолжается 57 дней в термостате
при 25—30°. Об идущем процессе восстановления нитратов свидетельствует
образование азотсодержащих газов, пены на поверхности среды, посинение
среды. Среда в пробирках мутнеет от развивающихся в ней бактерий.
Численность денитрифицирующих бактерий в почве определяют методом
предельных разведении.
Однако традиционный способ оценки численности не точен. Способность
к денитрификации не является детерминирующим признаком какой-либо одной
группы микроорганизмов ею обладает большинство почвенных прокариот.
Для исследования выделения газообразных соединений из почвы
используют два новых перспективных метода радиоизотопный
использованием радиоактивного изотопа
15
N достаточно сложен) и
ацетиленовый, основанный на ингибировании ацетиленом редуктазы закиси
азота, при котором восстановления нитратов до молекулярного азота не
происходит, а процесс редукции обрывается на стадии образования N
2
O,
улавливаемой газовым хроматографом. Оба метода применяют для опреде-
ления скорости денитрификации в почве.
Одни и те же культуры бактерий способны осуществлять как процесс
фиксации атмосферного азота, так и процесс денитрификации в зависимости от
экологических условий, в которых микроорганизмы существуют.
Экспериментально это явление продемонстрировано с культурой Azospirillum
brasilense, выделенной из корней. Культура выращивалась в хемостате при
температуре 30° в среде, лишенной связанного азота, следующего состава (г/л):
КН
2
Р0
4
- 2,0; NaCI - 0,1; MnSО
4
.
H
2
O - 0,01; Na
2
Mo0
4
.
2H
2
0 - 0,002; MgS0
4
.
7H
2
0 - 0,2; CaCl
2
.
H
2
O - 0,02; FeSО
4
.
7H
2
0 - 0,02; яблочная кислота - 1. Для
натрий лимоннокислый - 2,5г; КН2Р04 - 2 г; CaCl2 - 0,2 г; MgS04 . 7H20 - 2 г;
FеС1з - следы; дистиллированная вода — 500 мл. Оба раствора сливают и
доводят объем среды до 1000 мл. Устанавливают рН 7 по индикатору
бромтимоловому синему, который добавляют в среду. Цвет среды должен быть
зеленый. Среду наливают высоким слоем в пробирки, стерилизуют, затем
засевают комочками почвы. Инкубация продолжается 5—7 дней в термостате
при 25—30°. Об идущем процессе восстановления нитратов свидетельствует
образование азотсодержащих газов, пены на поверхности среды, посинение
среды. Среда в пробирках мутнеет от развивающихся в ней бактерий.
Численность денитрифицирующих бактерий в почве определяют методом
предельных разведении.
     Однако традиционный способ оценки численности не точен. Способность
к денитрификации не является детерминирующим признаком какой-либо одной
группы микроорганизмов — ею обладает большинство почвенных прокариот.
     Для исследования выделения газообразных соединений из почвы
используют два новых перспективных метода — радиоизотопный (с
                                               15
использованием    радиоактивного     изотопа        N   достаточно   сложен)   и
ацетиленовый, основанный на ингибировании ацетиленом редуктазы закиси
азота, при котором восстановления нитратов до молекулярного азота не
происходит, а процесс редукции обрывается на стадии образования N2O,
улавливаемой газовым хроматографом. Оба метода применяют для опреде-
ления скорости денитрификации в почве.
     Одни и те же культуры бактерий способны осуществлять как процесс
фиксации атмосферного азота, так и процесс денитрификации в зависимости от
экологических    условий,    в     которых     микроорганизмы        существуют.
Экспериментально это явление продемонстрировано с культурой Azospirillum
brasilense, выделенной из корней. Культура выращивалась в хемостате при
температуре 30° в среде, лишенной связанного азота, следующего состава (г/л):
КН2Р04 - 2,0; NaCI - 0,1; MnSО4 . H2O - 0,01; Na2Mo04 . 2H20 - 0,002; MgS04    .


7H20 - 0,2; CaCl2 . H2O - 0,02; FeSО4 . 7H20 - 0,02; яблочная кислота - 1. Для

                                      66