ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
перегородки – септы. Наблюдать почкующиеся дрожжи можно используя препарат «раздавленная кап-
ля».
Препарат «раздавленная капля». На середину чистого предметного стекла наносят небольшую кап-
лю воды, бульона или физиологического раствора (0,5%-ный раствор NaCl). В нее вносят петлей или
иглой исследуемый материал, после чего хорошо размешивают до получения слабомутной суспензии.
При рассмотрении микроорганизмов, выросших в жидких средах, каплю воды на предметное стекло
можно не наносить. Покровное стекло ставят на ребро у края капли с микроорганизмами и постепенно
опускают, стараясь, чтобы между стеклами не образовались пузырьки воздуха, мешающие микроскопи-
рованию. Ручкой петли прижимают покровное стекло к предметному. Излишек жидкости, выступаю-
щий за края покровного стекла, удаляют полоской фильтровальной бумаги. Приготовленный препарат
сразу же исследуют, так как жидкость высыхает и микроскопирование затрудняется.
В препарате «раздавленная капля» в светлом и темном поле можно установить форму и размеры
клеток, их физиологическое состояние, характер размножения, расположения спор, наличие запасных
питательных веществ в клетке, подвижность. В последнем случае необходимо отличать истинное движе-
ние от броуновского, при котором клетки остаются на месте, совершая колебательные движения, или пе-
ремещаются по току жидкости.
2 Ядро дрожжевой клетки можно наблюдать, проведя окраску по методу Фёльгена.
Из суточной культуры приготавливают мазок, высушивают на воздухе и фиксируют парами 2%-го
раствора осмиевой кислоты в течение 2 –
3 мин. Для фиксации на дно чашки Петри наносят 2 – 3 капли фиксатора, а предметное стекло помеща-
ют на маленькие стеклянные палочки мазком вниз. Далее мазок подвергают гидролизу в 1 н. растворе
соляной кислоты при температуре 60 °С в течение 2 – 3 мин, опуская предметное стекло в небольшой
химический стаканчик с соляной кислотой, помещенный в водяную баню. По окончании гидролиза ма-
зок немедленно промывают водой и заливают 1%-ным раствором формалина на 1,5 мин и вновь промы-
вают водой. Мазок окрашивают 0,1 – 1 %-ным водным раствором основного фуксина 1 – 2 мин, промы-
вают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют с объективом ×90. На розовом фоне цитоплаз-
мы ядро окрашено в ярко-малиновый цвет.
3 Спорообразование у дрожжей наблюдается у молодой по возрасту культуры, предварительно
выращенной в течение 1 – 2 сут. на богатых средах; у активно растущих дрожжей на голодных средах
или гипсовых блоках, при хорошей аэрации и повышенной влажности; при инкубации дрожжей при
температурах несколько меньших по сравнению с оптимальными (20 – 25°С) 4 – 6 недель.
Споры у дрожжей обнаруживают путем окраски спор дрожжей в фиксированном препарате. Фик-
сированными считают клетки микроорганизмов, в которых прерваны жизненные процессы, но полно-
стью сохранена тонкая структура. Окрашенные фиксированные клетки и детали их строения резче вы-
деляются на фоне препарата, что облегчает изучение формы, размеров, внутренних элементов (ядра,
оболочки, спор, включений), упрощает подсчет количества клеток. Фиксированные препараты обычно
рассматривают с иммерсией. Приготовление окрашенных фиксированных препаратов состоит из сле-
дующих этапов: приготовление мазка, высушивание, фиксация и окраска мазка.
Приготовление мазка. Мазки готовят на чистых обезжиренных предметных стеклах. Предметные
стекла берут пинцетом или пальцами за ребра и проносят через пламя горелки, слегка обжигая, после
чего кладут обожженной поверхностью кверху на мостик над ванночкой. Наносят каплю воды и вносят
в нее петлей дрожжи. Тщательно размешивают петлей суспензию и распределяют ее на площади 1 – 2
см
2
в виде тонкого ровного слоя.
Высушивание мазка проводят при комнатной температуре на воздухе. Правильно приготовленный
мазок высыхает сразу же после нанесения. Если высушивание протекает медленно, препарат мазком
вверх высоко поднимают над пламенем горелки и осторожно сушат в теплом воздухе без подогрева
стекла, иначе клетки деформируются.
Фиксация вызывает гибель клеток микроорганизмов, делает их безопасными (что особенно важно
при работе с патогенными культурами) и прочно прикрепляет клетки к стеклу, в результате они не смы-
ваются при последующих операциях, лучше окрашиваются, так как становятся более проницаемыми
для красителей.
Наиболее простым и распространенным способом фиксации является термическая обработка. Для этого
предметное стекло мазком вверх 3 – 5 раз проносят через наиболее горячую часть пламени горелки.
Предметное стекло нагревают 2 – 3 с, пока не возникнет ощущение легкого жжения, если приложить
его к кисти руки. Более длительная термическая фиксация может изменить структуру микробных кле-
ток и их форму. Недостаточно хорошо зафиксированный мазок смывается со стекла при последующей
обработке.
Окрашивание мазка. Готовый препарат заливают карболовым фуксином Циля и нагревают 2 – 3
мин до появления паров. Затем препарат обесцвечивают, погружая в 2%-ный раствор молочной кислоты
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 8
- 9
- 10
- 11
- 12
- …
- следующая ›
- последняя »
