Практикум по анатомии пищевого сырья. Хибхенов Л.В - 4 стр.

                                                                     часто для этих целей применяют ксилол. При обработке ксилолом
                Лабораторная работа 1                                материал становится прозрачным.
                                                                            4. Заливка материала проводится для того, чтобы полу-
Методы исследования. Устройство микроскопа и основные пра-           чить очень тонкий срез. При приготовлении препаратов для све-
вила работы с ним                                                    товой микроскопии объекты заливают в парафин, которому за-
                                                                     тем дают застыть.
Материал: микроскопы, постоянные гистологические препараты, пред-
метные и покровные стекла, луковица лука, раствор йода, стеклянные          5. Изготовление срезов. Как правило, толщина кусочков
палочки, препаровальные иглы, бритвы, вода водопроводная, пипетки,   материала слишком велика, чтобы сквозь них могло пройти дос-
фильтровальная бумага.                                               таточное для исследования под микроскопом количество света.
                                                                     Обычно приходится срезать очень тонкий слой исследуемого ма-
                    Общие сведения                                   териала, то есть готовить срезы. Срезы можно приготовить, вруч-
       Микроскопические методы. Биологические объекты мож-           ную при помощи остро отточенной бритвы. Но чаще применяют
но исследовать как живыми, так и фиксированными. Из иссле-           специальное устройство – микротом. При помощи микротомных
дуемого материала можно приготовить постоянные и временные           ножей можно готовить срезы толщиной 8-12 мкм.
препараты. Методика приготовления постоянных препаратов до-                 Срезы для светового микроскопа можно приготовить и из
вольно сложна, требует длительного времени и состоит из не-          замороженных кусочков материала, при этом первые четыре эта-
скольких этапов.                                                     па выпадают, соответственно время изготовления препаратов
       1. Фиксация – это сохранение материала в состоянии,           значительно сокращается. Для изготовления таких срезов приме-
близком к естественному. Для этого необходимо быстро умерт-          няют замораживающий микротом.
вить ткани. Это лучше достигается при работе с небольшими ку-               6. Окрашивание срезов. Биологические структуры на пре-
сочками живого материала. Используемое для этого вещество на-        паратах прозрачны и бесцветны, поэтому для получения контра-
зывается фиксатором. Быстрой фиксацией обеспечивается сохра-         ста между ними приходится прибегать к различным методам ок-
нение изначальной структуры объекта, причем ткани подверга-          рашивания. Окрашивают срезы или одним красителем, или при-
ются уплотнению, что позволяет готовить из них тонкие срезы.         меняют комбинированное окрашивание двумя или даже тремя
       Фиксацию осуществляют путем погружения материала в            красителями. При окрашивании парафиновых срезов парафин
96°-ный этиловый спирт или 4%-ный раствор формалина.                 удаляют при помощи растворителя (обычно ксилолом). Наиболее
       2. Обезвоживание проводится при подготовке материала          часто употребляется окрашивание при помощи гематоксилина и
к заливке и заключению его в соответствующую среду, которая          эозина. При таком способе ядра клеток окрашиваются гематокси-
не смешивается с водой. Воду необходимо удалить и с целью луч-       лином в синий или фиолетовый цвет, цитоплазма – в розовый.
шей сохранности препаратов. Для сохранения микроструктуры            Для выявления некоторых структур тканей и клеток (жир, волок-
материала обезвоживание необходимо проводить не сразу. Это           на, включения и др.) применяют специальные красители.
достигается постепенным увеличением концентрации этилового                  7. Заключение. Полностью окрашенные срезы на пред-
спирта (от 50 - до 96°- ного) и заканчивается процесс обезвожи-      метном стекле заключают в канадский бальзам, который не про-
вания абсолютным (100°- ным) спиртом.                                пускает воздух и способен не ограничено долго сохранять срез.
       3. Просветление. Некоторые из общеупотребимых сред            Заключенный в среду срез накрывают покровным стеклом. Перед
для заливки и заключения не смешиваются со спиртом. Поэтому          заключением срезы обезвоживают и пропитывают растворителем
его необходимо постепенно замещать веществом (просветляющее          бальзама – ксилолом.
вещество), с которым среда для заливки смешивается. Наиболее                Временные препараты для светового микроскопа в отли-