ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
ведется в строго определенных условиях и зависит от спосо-
ба работы адсорбента, растворителя количества нанесенного
вещества, длины пробега растворителя. Тонкослойная хро-
матография - очень удобный способ для разделения неболь-
ших количеств многокомпонентных смесей веществ. Пре-
имущества этого метода - быстрота и большая чувствитель-
ность (0,1-0,05 г вещества).
А, Б - чистые вещества («свидетели»)
С - смесь веществ
Задание: Нарисовать хроматограмму, рассчитать R
f
каждого пятна и сделать вывод о компонентах смеси.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ
РАДИАЛЬНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Реактивы и посуда:
Смесь аминокислот
Чистые аминокислоты (аланин, аспарагиновая кислота, ва-
лин)
Растворитель (смесь бутанола, уксусной кислоты, воды -
БУВ) 4:1:5
Проявитель (0,5 % раствор нингидрина в ацетоне)
Хроматографическая бумага
Стеклянные капилляры 3 шт.
Чашки Петри 2 шт.
Простой карандаш
!!! – работу выполнять аккуратно. Бумажную хромато-
грамму держать руками только за края. Пользоваться
только простым карандашом.
Хроматографическая камера состоит из двух чашек
Петри равного диаметра. В нижнюю из них помещают рас-
творитель - смесь БУВ (4:1:5). Из куска специальной фильт-
ровальной бумаги для хроматографии вырезают диск диа-
метром 10-12 см, в центре которого наносят кружок диамет-
ром 1-1,5 см (старт). По окружности наносят капилляром ис-
следуемую смесь веществ и чистые вещества -«свидетели» (
т.е. возможные компоненты в смеси). Работа проводится по
нанесению на бумажный диск растворов аминокислот на
специальном столе или на чистой бумаге. После нанесения
всех пятен бумажному диску нужно дать высохнуть, а само-
му в это время вымыть руки и сделать отверстие в центре
диска и вставить в него фитилек (для этого полоску бумаги
сворачивают в узкую трубочку, следите, чтобы фитиль не
был плоским, иначе растворитель будет распространяться по
диску не радиально!). Длина фитиля должна соответствовать
высоте нижней чашки Петри. Далее приготовленную хрома-
тограмму помещают в камеру, которую оставляют в покое до
тех пор, пока растворитель, распространяясь радиально по
бумаге, не окажется на расстоянии 0,5-1,0 см от краев диска
бумаги. После этого хроматограмму вынимают и отмеряют
карандашом границу растворителя, сушат па воздухе. Далее
хроматограмму несколько раз опрыскивают из пульвериза-
тора раствором нингидрина так, чтобы бумага становилась
только слабо влажной. Хроматограмму сушат на воздухе, а
затем прогревают в токе горячего воздуха над плиткой до
появления лиловых пятен. Пятна легко обводят карандашом
и высчитывают коэффициент распределения пятна R
f
= в/а.
Идентификацию компонентов смеси проводят путем сравне-
ния величины R
f
каждого пятна смеси с величиной R
f
«сви-
детелей».
А и В - чистые аминокислоты («свидетели»)
С- смесь аминокислот
в - расстояние от стартовой линии до центра пятна
а - расстояние от стартовой линии до финиша
Задание: Рассчитать R
f
каждого пятна и сделать вы-
вод о компонентах смеси. Приложить хроматограмму к отче-
ту или нарисовать.
ведется в строго определенных условиях и зависит от спосо- метром 10-12 см, в центре которого наносят кружок диамет-
ба работы адсорбента, растворителя количества нанесенного ром 1-1,5 см (старт). По окружности наносят капилляром ис-
вещества, длины пробега растворителя. Тонкослойная хро- следуемую смесь веществ и чистые вещества -«свидетели» (
матография - очень удобный способ для разделения неболь- т.е. возможные компоненты в смеси). Работа проводится по
ших количеств многокомпонентных смесей веществ. Пре- нанесению на бумажный диск растворов аминокислот на
имущества этого метода - быстрота и большая чувствитель- специальном столе или на чистой бумаге. После нанесения
ность (0,1-0,05 г вещества). всех пятен бумажному диску нужно дать высохнуть, а само-
А, Б - чистые вещества («свидетели») му в это время вымыть руки и сделать отверстие в центре
С - смесь веществ диска и вставить в него фитилек (для этого полоску бумаги
Задание: Нарисовать хроматограмму, рассчитать Rf сворачивают в узкую трубочку, следите, чтобы фитиль не
каждого пятна и сделать вывод о компонентах смеси. был плоским, иначе растворитель будет распространяться по
диску не радиально!). Длина фитиля должна соответствовать
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ высоте нижней чашки Петри. Далее приготовленную хрома-
РАДИАЛЬНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ тограмму помещают в камеру, которую оставляют в покое до
тех пор, пока растворитель, распространяясь радиально по
Реактивы и посуда: бумаге, не окажется на расстоянии 0,5-1,0 см от краев диска
Смесь аминокислот бумаги. После этого хроматограмму вынимают и отмеряют
Чистые аминокислоты (аланин, аспарагиновая кислота, ва- карандашом границу растворителя, сушат па воздухе. Далее
лин) хроматограмму несколько раз опрыскивают из пульвериза-
Растворитель (смесь бутанола, уксусной кислоты, воды - тора раствором нингидрина так, чтобы бумага становилась
БУВ) 4:1:5 только слабо влажной. Хроматограмму сушат на воздухе, а
Проявитель (0,5 % раствор нингидрина в ацетоне) затем прогревают в токе горячего воздуха над плиткой до
Хроматографическая бумага появления лиловых пятен. Пятна легко обводят карандашом
Стеклянные капилляры 3 шт. и высчитывают коэффициент распределения пятна Rf = в/а.
Чашки Петри 2 шт. Идентификацию компонентов смеси проводят путем сравне-
Простой карандаш ния величины Rf каждого пятна смеси с величиной Rf «сви-
детелей».
!!! – работу выполнять аккуратно. Бумажную хромато- А и В - чистые аминокислоты («свидетели»)
грамму держать руками только за края. Пользоваться С- смесь аминокислот
только простым карандашом. в - расстояние от стартовой линии до центра пятна
Хроматографическая камера состоит из двух чашек а - расстояние от стартовой линии до финиша
Петри равного диаметра. В нижнюю из них помещают рас- Задание: Рассчитать Rf каждого пятна и сделать вы-
творитель - смесь БУВ (4:1:5). Из куска специальной фильт- вод о компонентах смеси. Приложить хроматограмму к отче-
ровальной бумаги для хроматографии вырезают диск диа- ту или нарисовать.
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 7
- 8
- 9
- 10
- 11
- …
- следующая ›
- последняя »
