Составители:
Рубрика:
37
3.2.4. Окраска клеток
иодонитротетразолиум хлоридом
Метод основан на редукции трифенилтеразолиновых солей
и зависит от активности глицеральдегидфосфат-оксидоредуктазы,
которая образуется в клетках в процессе их жизнедеятельности.
Проникая в дрожжевую клетку, иодонитротетразолиум хлорид
(INT) образует за счет клеточных ферментов нерастворимые гранулы
иодонитротетразолиум-формазана, которые имеют интенсивную
красную окраску, наблюдаемую при микроскопировании. Количество
и размер гранул свидетельствует об активности окислительно-вос-
становительных процессов в клетке.
Приборы и посуда:
микроскоп;
обезжиренные предметные и покровные стекла;
стерильные пробирки;
тонкая стеклянная палочка.
Реактивы:
краситель иодонитротетразолиум хлорид (INT);
стерильная вода;
физиологический раствор (0,9 %-й раствор NaCl).
Материалы:
суспензия дрожжей концентрацией около 10
7
клеток/мл;
фильтровальная бумага.
Приготовление раствора красителя: 40 мг INT (Sigma)
растворить в 10 мл стерильной воды. Раствор следует хранить при
комнатной температуре в стеклянных бутылках из темного стекла.
Методика окрашивания
Дрожжи сначала центрифугировать в течение 5 мин при ско-
рости 4000 об/мин, слить надосадочную жидкость и снова ресус-
пензировать в физиологическом растворе до конечной концентрации
1х10
7
клеток/мл. В стерильных пробирках готовят смесь из 1 мл
суспензии дрожжей и 0,4 мл раствора INT. Дрожжи инкубировать
в течение 30 мин при температуре 30
о
С.
В живых клетках образуются красные гранулы, которые детек-
тируются при микроскопировании в светлом поле (рис. 3.3).
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 35
- 36
- 37
- 38
- 39
- …
- следующая ›
- последняя »
