Составители:
Рубрика:
39
Материалы:
суспензия дрожжей концентрацией около 10
7
клеток/мл;
фильтровальная бумага.
Приготовление раствора красителя: 300 мг Mg-ANS (Sigma)
растворить в 2 мл этилового спирта. Добавить 98 мл стерильной
воды. Раствор следует хранить при температуре 4
о
С в стеклянных
бутылках из темного стекла в течение 6 месяцев.
Методика окрашивания
Дрожжи центрифугировать в течение 5 мин при скорости
4000 об/мин, слить надосадочную жидкость и снова ресуспензиро-
вать в физиологическом растворе до конечной концентрации 1×10
7
клеток/мл. К 0,5 мл этой суспензии добавить 0,5 мл раствора Mg-ANS
и инкубировать в течение 5 мин при температуре 25
о
С. Затем под-
считать количество мертвых и живых клеток.
Микроскопирование проводят при увеличении 400х, свето-
делитель 4. УФ лампу микроскопа включить за 20 мин до исполь-
зования. Масло флюоресцирующее.
3.2.6. Окраска дигидрородамином
Накопление свободных радикалов (ROS, reactive oxygen
species) в клетке свидетельствует либо о ее старении, либо о том, что
она находится в состоянии стресса. Метод дигидрородаминового
окрашивания позволяет оценивать статус ROS по количеству флуо-
ресцирующих (красных или зеленых) клеток (рис. 3.4).
Приборы и посуда:
микроскоп;
обезжиренные предметные и покровные стекла;
стерильные пробирки;
тонкая стеклянная палочка.
Реактивы:
краситель
дигидрородамин
;
стерильная вода;
физиологический раствор (0,9 %-й раствор NaCl).
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 37
- 38
- 39
- 40
- 41
- …
- следующая ›
- последняя »
