Биотехнология органических кислот и белковых препаратов. Муратова Е.И - 31 стр.

UptoLike

4.2. Содержание компонентов
Варианты
Компоненты, %
1 2 3 4 5 6
Пшеничные отруби 100 90 80 70 60 50
Древесные опилки 0 10 20 30 40 50
Рассчитать массу компонентов для каждого варианта, взвесить на технических весах. Высыпать на гладкую
поверхность (стекло) опилки, отруби и смешать.
5. Рассчитать количество воды, необходимое для увлажнения среды до 60 % влажности. Уменьшить расход воды на 1
мл, учитывая посевной материал вводимый в виде суспензии конидий. Результаты расчета внести в табл. 4.3.
4.3. Результаты определения расхода воды для увлажнения среды
Варианты
Промежуточные данные
1 2 3 4 5 6
6. Отмерить необходимое количество воды мерным цилиндром, медленно приливая ее к массе; перемешивать для
равномерного увлажнения частиц. Увлажненную массу перенести в коническую колбу. Во избежание загрязнения
поверхности горлышка колбы следует использовать металлическую воронку. Колбы закрыть ватной пробкой, бумажным
колпачком и стерилизовать 30 мин при 120 °С в автоклаве. Содержимое колбы после стерилизации и охлаждения
интенсивно встряхнуть.
7. Для изучения влияния влажности питательной среды на накопление ферментов приготовить шесть вариантов сред
по 20 г с разным содержанием влаги, согласно табл. 4.4.
4.4. Рекомендуемая влажность питательной среды
Варианты
Показатели влажности
1 2 3 4 5 6
Заданная влажность, % 45 50 55 60 65 70
Влажность среды до увлажнения, %
Расход воды на 20 г среды, мл
Взвесить навески пшеничных отрубей и древесных опилок по варианту 4 табл. 4.2. Рассчитать влажность среды и
расход воды до достижении влажности уменьшая его на 1 мл суспензии посевного материала согласно заданию 3.
Результаты расчета внести в табл. 4.3. Дальнейшие операции выполнить как в п. 6.
8. Засеять питательную среду суспензией спор гриба. Для этого в пробирку с культурой гриба на скошенной
агаризованной среде налить стерильную воду до верхнего края косяка. Конидий перевести концом стерильной пипетки во
взвешенное состояние и отобрать 1 мл суспензии спор, перенося ее затем в колбу со стерильной средой. После засева среду
тщательно перемешать путем встряхивания и пересыпать в стерильную кювету, потом закрыть ее крышкой. Кювета имеет
перфорации для воздухообмена. Операции по засеву среды необходимо производить, соблюдая асептические условия, возле
пламени спиртовки. Кюветы с засеянной средой поместить в термостат. Выращивание проводить в течение 48…54 ч при
температуре 33 °С в течение первых 12 ч роста и 28…30 °Св последующие.
З А Н Я Т И Е 2
Выросшая культура имеет вид коржа с пушистой поверхностью. Для каждого коржа следует определить влажность (для
высушивания брать 3 г культуры) и амилолитическую активность.
Порядок выполнения работы
1. Провести экстракцию ферментов из выросшей культуры гриба. Корж тщательно измельчить в кювете с помощью
шпателя и на технических весах взвесить 5 г поверхностной культуры. Шпатель обязательно погрузить в дезинфецирующий
раствор. Взвешенную порцию поместить в фарфоровую ступку и тщательно растереть пестиком со 100 мл забуференной
дистиллированной воды, которую получают смешивая 10 мл ацетатного буфера (рН 4,7) и 90 мл дистиллированной воды.