Биотехнология органических кислот и белковых препаратов. Муратова Е.И - 36 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТГТУ | Тамбов

Составители: 

Рубрика: 

%100
ma
ba
W
−
−
=
, (5.2)
где m – масса бюкса без осадка, г; а – масса бюкса с влажным осадком, г;
b – масса бюкса с сухим осадком, г.
8.
Для определения количества осажденного активного фермента – амилазы, использовать вторую центрифужную
пробирку. В нее к осадку добавить дистиллированную воду в количестве, равном объему снятого декантата. Стеклянной
палочкой интенсивно перемешать осадок до полного растворения. Полученный раствор использовать для определения
амилолитической активности осадка колориметрическим методом.
9. Колориметрический метод определения амилолитической активности осуществляется по следующей схеме.
В две пробирки диметром 2 см и высотой 18 см налить по 10 см
3
1 % раствора крахмала и поставить в ультратермостат
с температурой 30 °С
на 5…10 мин. Затем, не вынимая пробирок из термостата, добавить в первую пробирку 5 см
3
дистиллированной воды
(контрольная), во вторую
5 см
3
предварительно разведенного 1 : 5 ферментного раствора (опытная). Смесь быстро перемешать и выдерживать в
ультротермостате 10 мин по секундомеру.
Из реакционных смесей контрольного и опытного растворов отобрать 0,5 см
3
раствора и перенести их в колбы с
предварительно налитыми 50 см
3
рабочего раствора йода. Содержимое колб перемешать. Полученные растворы должны
приобрести следующую окраску: контрольный – синюю; опытный – фиолетовую (с различной интенсивностью в
зависимости от количества негидролизованного крахмала).
Непосредственно после смешивания растворов определить их оптическую плотность на фотоэлектроколориметре,
используя светофильтр № 3 и кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Контрольным раствором при
колориметрировании исследуемых растворов является дистиллированная вода.
Оптическая плотность контрольного раствора соответствует количеству исходного крахмала субстрата. Оптическая
плотность опытного раствора соответствует количеству крахмала, оставшегося после действия фермента. Разница между
показателями оптических плотностей соответствует гидролизованному количеству крахмала субстрата. Количество
гидролизованного крахмала рассчитывать по формуле
(
)
1
21
1,0
D
DD
C
−
=
, (5.3)
где D
1
– оптическая плотность контрольного раствора; D
2
– оптическая плотность опытного раствора; 0,1 – количество
крахмала, взятое для испытания в качестве субстрата, г.
Амилолитическую активность препарата рассчитывать по формуле
(
)
п
С
АС
03766,0264,7100 −
=
, (5.4)
где С – количество гидрлизованного крахмала, г; n – количество фермента взятое для испытания, мг; 100 – коэффициент
пересчета миллиграммов в граммы; 7,264 и 0,03766 – коэффициенты расчетного уравнения.
10. Результаты определения амилолитической активности выделенного ферментного препарата свести в табл. 5.7
5.7. Определение амилолитической активности
Вариант
Оптическая плотность
контрольного раствора
Оптическая плотность
опытного раствора
Количество гидролизованного
крахмала, г
Объем ферментного
раствора, мл
Влажность осадка, %
Разведение
Количество фермента взятое
для испытания, мг
Количество гидролизованного
крахмала, г
Амилолитическая активность, ед/г
1…4
11. Построить график зависимости амилолитической активности выделенного ферментного препарата от концентрации
этанола.

Страницы