ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
Лизис дрожжей с использованием ферментных препаратов по сравнению с автолизом представляет более широкие
возможности для получения продуктов различного состава. Применение ферментных препаратов специфического действия
позволяет быстро удалить клеточную стенку, а из освободившихся протопластов выделить продукты различной степени
гидролиза в зависимости от целевого назначения. Для получения недеградированных цитоплазматических компонентов
следует использовать биомассу с низкой автолитической активностью. Ферментативный лизис клеточных стенок дрожжей
проводят с помощью различных ферментов и мультиэнзимных композиций.
Способы получения продуктов глубокого расщепления основываются на сочетании автолиза дрожжей и их лизиса
препаратами литического или протеолитического действия. Для активации протеолиза дрожжей используют растительные,
животные и микробные протеазы. Протеазы могут быть неспецифичными по отношению к дрожжевому белку, но в
сочетании с автолитическими протеазами дрожжей дают хороший эффект. Так, например, папаин, пепсин, протосубтилин
Г10х в соотношении с белком пекарских дрожжей 1 : 1000 гидролизуют его не более чем на 4 %, а добавление этих
препаратов в том же соотношении к белку автолизирующихся дрожжей через 5 ч после начала автолиза позволяет через час
получить глубину гидролиза белка 95 %. В контроле этот уровень достигается лишь после 20 ч автолиза.
С применением препарата Лизосубтилина Г10х разработан способ получения белково-витаминного обогатителя пищи
из гидролизных дрожжей рода Сапdida. Процесс включает следующие операции: кормовые дрожжи с влажностью 75…90 %
нагревают до температуры 46…50 °С, вносят Лизосубтилин в количестве 0,2…0,5 % к сухому веществу дрожжей, проводят
гидролиз в течение 20…30 ч при постоянной температуре и перемешивании. Затем непрогидролизованные остатки клеток
отделяют сепарацией, а жидкую фазу высушивают. Сухой продукт представляет собой порошок соломенно-желтого цвета с
приятным пищевым запахом. Содержание аминного азота составляет 4,3 %, около половины определяемых аминогрупп
принадлежат свободным аминокислотам, среди которых преобладают аланин, лизин, лейцин (соответственно 16,0; 15,7 и
12,4 %).
Лизосубтилин может использоваться для получения белковых продуктов из дрожжей спиртового производства. Эти
дрожжи обладают заметной автолитической активностью, причем оптимальные условия автолиза и лизиса Лизосубтилином
совпадают, что позволяет вести процесс при постоянных значениях рН и температуры (рН 6,3–6,8, температура 50…55 °С).
При дозе препарата 0,1 % к сухим веществам биомассы дрожжей выход растворимых форм азота и углеводов возрастает в 2-
2,5 раза
(по сравнению с автолизом), через 6 ч в жидкую фазу ферментолизата переходит около половины азотистых соединений и
треть углеводов. Выход аминного азота составляет около 3 % к сухой массе дрожжей.
Модифицированные белки (частично или полностью гидролизованные) получают из белковых продуктов с применением
протеолитических, ферментных препаратов (пепсин, папаин, бромелаин) или кислотного гидролиза. Они используются как
функциональные и вкусовые добавки к пище.
Порядок выполнения работы
На лабораторной работе группа студентов делится на две бригады, первая бригада выделяет белок из муки злаковых
культур, вторая – из измельченных бобовых культур.
1. Для создания лучших условий экстрагирования белков необходимо просеять муку, выделяя фракцию с размером
частиц не более 100 мкм, и отбрасывая оболочки и более крупные частицы, богатые крахмалом.
2. Взвесить в химическом стакане навеску муки массой 10 г, постепенно прилить к ней 60 мл 10 % (NH
4
)
2
SO
4
.
Суспензию настаивать
10…15 мин для растворения белков. Содержимое стакана разлить поровну в две центрифужные пробирки.
3. Разделить суспензию на центрифуге при скорости вращения ротора 500 об/мин и продолжительности процесса
центрифугирования
10 мин.
4. Фугат собрать в чистый химический стакан и определить с помощью биуретового метода Яроша концентрацию
белка.
5. Для этого в пробирку объемом 20 мл прилить 2,4 мл раствора мочевины, 0,1 мл фугата и 2,5 мл биуретового
реактива. Записать время внесения биуретового реактива. Смесь хорошо перемешать и поместить в водяную баню с
температурой 40 °С на 10 мин. Затем охладить ее до 20 °С под струей холодной воды или на воздухе.
6. Через 30 минут после внесения биуретового реактива определить оптическую плотность раствора, пользуясь
кюветами № 5 и светофильтром № 6 ФЭК-56. Количество белка определить по предватительно построенной калибровочной
кривой.
7. В три пробирки объемом 20 мл налить по 5 мл фугата и провести экстракцию белков раствором сульфата алюминия
разной концентрации.
В первую пробирку добавить 5 мл 0,5 % Al
2
(SO
4
)
3
c температурой 3…5 °С, во вторую – 5 мл 2,5 % Al
2
(SO
4
)
3
c
температурой 3…5 °С, в третью – 5 мл 5 % Al
2
(SO
4
)
3
c температурой 3…5 °С. Содержимое каждой из пробирок тщательно
перемешать и провести высаливание белков при температуре 3…5 °С (в холодильнике) в течение 15 мин.
8. Образовавшийся осадок отделить фильтрованием через складчатый фильтр.
9. В фильтрате определить количество белка с помощью биуретового метода Яроша в соответствии с пунктами 5 и 6.
10. Рассчитать коэффициент извлечения белка
н
кн
Б
с
сс −
= (6.1)
где с
н
– концентрация белка в фугате, г/л; с
к
– концентрация белка в фильтрате, г/л.
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 37
- 38
- 39
- 40
- 41
- …
- следующая ›
- последняя »
