Методические указания для самостоятельной подготовки к лабораторным занятиям по биологической химии. Пластинина З.А - 24 стр.

используя всевозможные различия в свойствах молекул.                   Следующая стадия очистки — освобождение от
После применения какого-либо одного из них применение            низкомолекулярных примесей веществ, использованных при
другого, основывающегося на тех же физических свойствах,         экстракции и грубой очистке белков; раствор подвергают
нецелесообразно, так как это скорее даст всего лишь              диализу (электродиализу) и ультрафильтрации.
относительно небольшую дополнительную очистку.                         Дальнейшую более тонкую очистку проводят по
      Как правило, используют схему: предварительно              схемам, специально разработанным для отдельных белков с
готовят биологический материал путем механического               учетом их физико-химических и биологических свойств.
измельчения, затем взятый образец гомогенизируют, что            Широко        распространенными        методами      являются
позволяет повысить эффективность извлечения искомого             кристаллизация и перекристаллизация исследуемого белка,
белка. Белок переводят в растворимое состояние путем             адсорбционная       и ионообменная хроматография; гель-
экстракции   водой,     буферными    растворами      солей   и   фильтрация;       электрофорез;      особенно     эффективны
детергентов, иногда — неполярными растворителями. Затем          следующие методы: жидкостная хроматография высокого
белок фракционно осаждают нейтральными солями, обычно            разрешения и аффинная хроматография.
(NH4)2 SO4, или органическими растворителями: этанолом,                Степень очистки белка проверяют по так называемой
ацетоном и изопропанолом. При этом важным условием               удельной активности (его специфической биологической
здесь является определение оптимальных значений рН,              функции), т. е. по активности, приходящейся на 1 мкг (мг, г)
ионной   силы   и     температуры.   Величина   рН     должна    белка. Критерием гомогенности идентифицированного белка
соответствовать рI выделяемого белка. Для предотвращения         являются   неизменяющаяся         удельная   активность   при
денатурации, как правило, создают низкую        ионную силу      попытках дальнейшей очистки, одна полоса или пик при
раствора, осаждение проводят при пониженной температуре          ультрацентрифугировании, электрофорезе, хроматографии.
(около 4 °С); для стабилизации исследуемого белка в раствор      Одноцепочечный белок должен быть гомогенным при N-, С-
иногда вводят ионы металлов.                                     концевом      анализе.   Примеси     сопутствующих     белков
                                                                 определяют по их специфической биологической функции.