Методические указания для самостоятельной подготовки к лабораторным занятиям по биологической химии. Пластинина З.А - 44 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

"к" - положительную пробу на декстрины (окраска красных
тонов) и буквой "ж" - отрицательную пробу (желтая окраска
иода).
На основании полученных данных делают вывод о
величине температурного оптимума для амилазы слюны.
NN
про
бирок
Т
о
С. в
пробир.
Реакция с иодом по истечении времени (в мин.)
1 2 4 6 8 10 12
1 100
2 40
3 15-20
4 0
Лабораторная работа: Определение оптимального
значения рН для амилазыслюны
Оборудование: Фотоэлектроколориметр; термостат;
пипетки на 1 мл (2 шт.); бюретки прямые с краном на 50
мл (5 шт.); колбы конические на 100 и 250 мл; воронка;
Реактивы: иод (0,3%-ный в иодиде калия (3%-ном);
крахмал (0,1%-ный); дигидрофосфат калия ( 1/15 М) и
гидрофосфат натрия (1/15 М); слюна, разбавленная в 40
раз.
Ход работы: Пробирки устанавливают в два ряда: по 5 шт. в
каждом ряду. В пробирки первого ряда вносят по 0,2 мл
разбавленного раствора слюны, в пробирки второго ряда - по
0,2 мл дистиллированной воды. Затем в каждую пробирку
приливают из бюретки по 4 мл фосфатного буферного
раствора таким образом, чтобы первые пробирки обоих ря-
дов содержали буферный раствор с рН 5,59; вторые
пробирки с рН 6,24; третьи с рН 6,98; четвертые с рН 7,38;
пятые с рН 8,04. Пробирки закрывают пробками и
помещают в термостат при температуре 37°С на 10 мин,
после чего во все пробирки вносят по 0,2 мл раствора
крахмала, нагретого до 37°С. Содержимое пробирок переме-
шивают и пробы инкубируют в термостате в течение 10-15
мин при 37°С. Далее пробирки помещают в лед и в каждую
пробирку прибавляют по 3-4 капли раствора иода,
перемешивают содержимое и колориметрируют со
светофильтром N 7.
Активность амилазы рассчитывают по разнице
экстинкций между контрольной и опытной пробами (с
раствором слюны). Еф = Е
к
- Е
оп
,
где, Еф - экстинкция, соответствующая активности
амилазы в исследуемом растворе, Ек - экстинкция
контрольной пробы; Eon - экстинкция опытной пробы. 
"к" - положительную пробу на декстрины (окраска красных                  Ход работы: Пробирки устанавливают в два ряда: по 5 шт. в
тонов) и буквой "ж" - отрицательную пробу (желтая окраска                каждом ряду. В пробирки первого ряда вносят по 0,2 мл
иода).                                                                   разбавленного раствора слюны, в пробирки второго ряда - по
         На основании полученных данных делают вывод о                   0,2 мл дистиллированной воды. Затем в каждую пробирку
величине температурного оптимума для амилазы слюны.                      приливают из бюретки по 4 мл фосфатного буферного
NN    ТоС. в             Реакция с иодом по истечении времени (в мин.)   раствора таким образом, чтобы первые пробирки обоих ря-
про   пробир.        1        2      4       6     8      10      12
                                                                         дов содержали    буферный     раствор с рН 5,59;       вторые
бирок
                                                                         пробирки с рН 6,24; третьи с рН 6,98; четвертые с рН 7,38;
1        100                                                             пятые с     рН   8,04. Пробирки закрывают пробками и
2        40
3        15-20                                                           помещают в термостат при температуре 37°С на 10 мин,
4        0                                                               после чего во все    пробирки вносят по 0,2      мл раствора
                                                                         крахмала, нагретого до 37°С. Содержимое пробирок переме-
    Лабораторная работа: Определение оптимального                        шивают и пробы инкубируют в термостате в течение 10-15
                 значения рН для амилазыслюны                            мин при 37°С. Далее пробирки помещают в лед и в каждую
                                                                         пробирку    прибавляют   по   3-4   капли   раствора    иода,
Оборудование:        Фотоэлектроколориметр;            термостат;        перемешивают     содержимое     и    колориметрируют       со
пипетки на 1 мл (2 шт.); бюретки прямые с краном на 50                   светофильтром N 7.
мл (5 шт.); колбы конические на 100 и 250 мл; воронка;                              Активность амилазы рассчитывают по разнице
                                                                          экстинкций между контрольной и опытной пробами (с
Реактивы:         иод (0,3%-ный в иодиде калия (3%-ном);                              раствором слюны). Еф = Ек - Еоп ,
крахмал (0,1%-ный); дигидрофосфат калия ( 1/15 М) и                            где, Еф - экстинкция, соответствующая активности
гидрофосфат натрия (1/15 М); слюна, разбавленная в 40                    амилазы в исследуемом растворе,       Ек    -    экстинкция
раз.                                                                     контрольной пробы; Eon - экстинкция опытной пробы.

Страницы