Методические указания для самостоятельной подготовки к лабораторным занятиям по биологической химии. Пластинина З.А - 53 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

Подготовка пластины с адсорбентом. Для н
анесения на
пластины используют смесь силикагеля марки КСК и
гипса. Гипс предварительно просушивается в течение 24 ч
при температуре 115—120°С. Оба адсорбента измельчают и
просеивают через сито с числом 200 меш.
Пластины размером 17 х 14 см тщательно обезжири-
вают. Готовят смесь из 4,5 г силикагеля и 0,5 г гипса,
добавляя дистиллированную воду при тщательном поме-
шивании в ступке до консистенции «жидкой сметаны».
Полученную массу равномерно распределяют по поверх-
ности пластины, после чего ее подсушивают на воздухе в
течение 8—12 ч. В таком виде пластина готова для прове-
дения анализа.
Раствор исследуемых липидов в хлороформе (0,3— 0,5
мг) наносят на пластину с помощью микропипетки. Пробу
наносят, отступя примерно 1,5 см от края пластины. При
нанесении необходимо получить возможно меньший
диаметр пятна, не нарушая слой силикагеля.
После нанесения липидов на пластину ее помещают в
камеру, куда предварительно наливается смесь рас-
творителей, количество которой должно обеспечивать слой
жидкости на дне камеры в 0,8—1,0 см. Пластины уста-
навливаются под углом так, чтобы нижний край был
погружен в жидкость на 0,5 см. Хроматографирование
производят в течение 45—60 мин при комнатной темпе-
ратуре. Фронт растворителей за это время поднимается на
9—10 см. Пластины извлекают из камеры и сушат на
воздухе до исчезновения запаха растворителей. Для про-
явления отдельных липидных фракций пластины поме-
щают в камеру, насыщенную парами йода. Йод, раство-
ряясь в липидах, окрашивается в них в темно-желтый
цвет (интенсивность окраски зависит от длительности про
явления).
На проявленных хроматограммах фракции липидов
располагаются в порядке возрастания величин Rf следу-
ющим образом: фосфолипиды, холестерин,
моноацилглицерины, диацилглицерины, свободные жирные
кислоты, триглицериды, эфиры холестерина. 
Подготовка пластины с адсорбентом. Для нанесения на       погружен в жидкость на 0,5 см. Хроматографирование
пластины используют смесь силикагеля марки КСК и          производят в течение 45—60 мин при комнатной темпе-
гипса. Гипс предварительно просушивается в течение 24 ч   ратуре. Фронт растворителей за это время поднимается на
при температуре 115—120°С. Оба адсорбента измельчают и    9—10 см. Пластины извлекают из камеры и сушат на
просеивают через сито с числом 200 меш.                   воздухе до исчезновения запаха растворителей. Для про-
    Пластины размером 17 х 14 см тщательно обезжири-      явления отдельных липидных фракций пластины поме-
вают. Готовят смесь из 4,5 г силикагеля и 0,5 г гипса,    щают в камеру, насыщенную парами йода. Йод, раство-
добавляя дистиллированную воду при тщательном поме-       ряясь в липидах, окрашивается в них в темно-желтый
шивании в ступке до консистенции «жидкой сметаны».        цвет (интенсивность окраски зависит от длительности про
Полученную массу равномерно распределяют по поверх-       явления).
ности пластины, после чего ее подсушивают на воздухе в        На проявленных хроматограммах фракции липидов
течение 8—12 ч. В таком виде пластина готова для прове-   располагаются в порядке возрастания величин Rf следу-
дения анализа.                                            ющим        образом:     фосфолипиды,       холестерин,
    Раствор исследуемых липидов в хлороформе (0,3— 0,5    моноацилглицерины, диацилглицерины, свободные жирные
мг) наносят на пластину с помощью микропипетки. Пробу     кислоты, триглицериды, эфиры холестерина.
наносят, отступя примерно 1,5 см от края пластины. При
нанесении   необходимо    получить   возможно   меньший
диаметр пятна, не нарушая слой силикагеля.
    После нанесения липидов на пластину ее помещают в
камеру, куда предварительно наливается смесь рас-
творителей, количество которой должно обеспечивать слой
жидкости на дне камеры в 0,8—1,0 см. Пластины уста-
навливаются под углом так, чтобы нижний край был

Страницы