ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
Лабораторная работа:
Разделение фосфолипидов
печени методом тонкослойной хроматографии
Цель. Ознакомиться с методом разделения
фосфолипидов с помощью хроматографии в тонком слое.
Фосфолипиды отличаются по структуре и поэтому в
различной степени адсорбируются силикагелем, нанесенным
на стеклянную пластину в виде тонкого слоя. Благодаря
продвижению по слою силикагеля органических
растворителей и в зависимости от сродства к ним
отдельных фосфолипидов происходит непрерывный процесс
сорбции и десорбции, что в конечном итоге приводит к
разделению смеси фосфолипидов на отдельные
компоненты.
Ход работы:
Хлороформный экстракт липидов печени
(содержащий 0,5 мг) наносят на пластину с тонким слоем
силикагеля (диаметр контура 3—5 мм), помещают в камеру
и хроматографируют в течение часа. После разделения
фосфолипидные фракции проявляют в парах йода. При ис-
пользовании данной системы растворителей липиды на
пластинке располагаются в порядке возрастания величины
Rf следующим образом: лизофосфатиды, сфингомиелины,
фосфатидилхолины, фосфатидилсерины и
фосфатидилэтаноламины, фосфатидные кислоты,
холестерин и нейтральные жиры (ТАГ).
Для количественной характеристики фосфолипидного
спектра отдельные зоны силикагеля, соответствующие
пятнам фосфолипидов, соскабливают с пластины и
пере
носят в пробирки. В качестве контроля на содержание
фосфора в самом силикагеле с пластины соскабливают
свободные от липидов участки, соответствующие по раз-
мерам пятен фосфолипидов. Затем в каждую пробирку с
силикагелем и в 2 дополнительные пустые пробирки, слу-
отдельных фосфолипидов происходит непрерывный процесс
сорбции и десорбции, что в конечном итоге приводит к
разделению смеси фосфолипидов на отдельные
компоненты.
Ход работы: Хлороформный экстракт липидов печени
(содержащий 0,5 мг) наносят на пластину с тонким слоем
силикагеля (диаметр контура 3—5 мм), помещают в камеру
и хроматографируют в течение часа. После разделения
фосфолипидные фракции проявляют в парах йода. При ис-
пользовании данной системы растворителей липиды на
пластинке располагаются в порядке возрастания величины
Rf следующим образом: лизофосфатиды, сфингомиелины,
фосфатидилхолины, фосфатидилсерины и
фосфатидилэтаноламины, фосфатидные кислоты,
Лабораторная работа: Разделение фосфолипидов холестерин и нейтральные жиры (ТАГ).
печени методом тонкослойной хроматографии Для количественной характеристики фосфолипидного
Цель. Ознакомиться с методом разделения спектра отдельные зоны силикагеля, соответствующие
фосфолипидов с помощью хроматографии в тонком слое. пятнам фосфолипидов, соскабливают с пластины и
Фосфолипиды отличаются по структуре и поэтому в переносят в пробирки. В качестве контроля на содержание
различной степени адсорбируются силикагелем, нанесенным фосфора в самом силикагеле с пластины соскабливают
на стеклянную пластину в виде тонкого слоя. Благодаря свободные от липидов участки, соответствующие по раз-
продвижению по слою силикагеля органических мерам пятен фосфолипидов. Затем в каждую пробирку с
растворителей и в зависимости от сродства к ним силикагелем и в 2 дополнительные пустые пробирки, слу-
