Теоретические основы пищевой биотехнологии. Зюзина О.В - 4 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТГТУ | Тамбов

Составители: 

Рубрика: 

Лабораторная работа 1
ПОЛУЧЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ
Цель работы: приобретение опыта по выделению чистой культуры микроорганизмов.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
В биотехнологических производствах в качестве одного из видов исходных материалов используют чис-
тую культуру микроорганизмов.
Чистой культурой (ЧК) называют популяцию, представляющую собой потомство одной или нескольких
клеток одного вида микроорганизмов. В генетических исследованиях пользуются клонами – чистыми культу-
рами, полученными от одной споры или гаплоидной клетки.
В естественных условиях различные объекты содержат, как правило, смешанную микрофлору. Для диаг-
ностических исследований с целью выяснения возбудителей порчи пищевых продуктов или их обсемененности
микроорганизмами требуется выделение чистой культуры. Методы выделения ЧК могут быть прямыми и кос-
венными. Прямые – основаны на выделении под непосредственным контролем через микроскоп, например ме-
тод Линднера. Известны методы извлечения одной клетки из взвеси микроорганизмов с помощью специальных
приборов (микроманипулятор, микроселектор Перфильева) под контролем микроскопа. Однако наиболее рас-
пространенным способом выделения чистых культур являются косвенные методы выделения чистой культуры
микроорганизмов, основанные на изоляции одной микробной клетки от массы микроорганизмов и последую-
щем выращивании потомства этой клетки на питательных средах изолированно от других видов.
Для посева чаще используются агаризованные среды в чашках Петри. Этот метод предложен известным не-
мецким микробиологом Кохом и носит название метода пластинчатых (или чашечных) культур Коха.
Основной задачей метода является разведение концентрации микроорганизмов в исследуемом материале с
таким расчетом, чтобы при посеве его на питательной среде выросли изолированные колонии. Существуют два
основных метода разведения исследуемого материала:
1) на поверхности плотной питательной среды «методом истощающего посева»;
2) предварительное разведение материала в физиологическом растворе или стерильной водопроводной во-
де в пробирках и высев готового разведения на плотную питательную среду.
Метод истощающего посева на поверхности плотной среды используется для выделения чистых культур
аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов. С этой целью для посева берут ряд чашек Петри с
плотной средой; в первую чашку наносят исследуемый материал и распределяют его по поверхности шпателем
Дригальского или бактериологической петлей. Затем, не стерилизуя шпатель (или петлю), производят посев
последовательно на поверхность среды в остальных чашках (рис. 1). Количество материала, внесенного в среду,
при этом последовательно убывает (истощающий посев).
Метод предварительного разведения исследуемого материала в стерильной водопроводной воде (или
физиологическом растворе) используется для выделения чистых культур микроорганизмов, как аэробных, так и
анаэробных. Готовят разведения материала в 10 – 100 раз и более (в зависимости от предполагаемой обсеме-
ненности микроорганизмами) и производят посев разведений, пользуясь поверхностным или глубинным мето-
дом (рис. 2).
Выделение чистых культур строгих анаэробов по методу Коха требует условий выращивания без доступа
кислорода.
Если разведение исследуемого материала выполнено правильно, на поверхности среды или в ее толще (в
зависимости от метода посева) образуются изолированные колонии микроорганизмов, видимые невооружен-
ным глазом.
Каждая колония состоит из клеток одного вида, однако для выделения чистой культуры необходимо пере-
сеять колонию на отдельную среду, т.е. изолировать ее от микроорганизмов других видов.
в)
а)
б)
г)
Рис. 1. Посев микроорганизмов на поверхность
плотной среды в чашках Петри:
а – шпатель Дригальского; б – положение чашки и руки при посеве шпателем; в –
рост микроорганизмов после рассева шпателем; г – рост микроорганизмов после
рассева петлей

Страницы